四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2006年
3期
361-364
,共4页
王保宁%施桥发%李虹%张卫东%庄永华%杨靖%蒋忠华%李明远
王保寧%施橋髮%李虹%張衛東%莊永華%楊靖%蔣忠華%李明遠
왕보저%시교발%리홍%장위동%장영화%양정%장충화%리명원
HPV-16%E4基因%原核表达
HPV-16%E4基因%原覈錶達
HPV-16%E4기인%원핵표체
目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16) E4 基因( E4 ),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性.方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增 E4 完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4).经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果克隆到完整 E4 基因为342 bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%.在28 ℃和37 ℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导18 h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Western blot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His).结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16 E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础.
目的剋隆人乳頭瘤病毒-16型(HPV-16) E4 基因( E4 ),構建E4蛋白錶達重組工程菌,探索錶達條件和鑒定錶達產物特性.方法以臨床HPV-16暘性宮頸炎患者上皮細胞提取物為模闆,PCR擴增 E4 完整基因,併定嚮剋隆到pET32a(+)原覈錶達質粒中,經雙酶切和測序鑒定後轉入大腸桿菌BL-21(DE3),穫得工程菌(BL-21/E4).經IPTG誘導,錶達蛋白用SDS-PAGE和Western blot鑒定.結果剋隆到完整 E4 基因為342 bp,與HPV-16東亞型的同源性為99%,與其他HPV16型的同源性高于97%.在28 ℃和37 ℃,0.1 mmol/L的IPTG誘導18 h時,重組蛋白(rE4)錶達量分彆佔菌體總蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Western blot證明rE4蛋白與錶達載體的標籤蛋白形成相對分子質量約34×103的可溶性融閤蛋白(rE4/His).結論成功構建瞭錶達帶標籤的融閤重組蛋白(rE4/His)的重組大腸桿菌BL-21/E4錶達繫統,這為高純度HPV-16 E4蛋白的製備和相關研究奠定瞭基礎.
목적극륭인유두류병독-16형(HPV-16) E4 기인( E4 ),구건E4단백표체중조공정균,탐색표체조건화감정표체산물특성.방법이림상HPV-16양성궁경염환자상피세포제취물위모판,PCR확증 E4 완정기인,병정향극륭도pET32a(+)원핵표체질립중,경쌍매절화측서감정후전입대장간균BL-21(DE3),획득공정균(BL-21/E4).경IPTG유도,표체단백용SDS-PAGE화Western blot감정.결과극륭도완정 E4 기인위342 bp,여HPV-16동아형적동원성위99%,여기타HPV16형적동원성고우97%.재28 ℃화37 ℃,0.1 mmol/L적IPTG유도18 h시,중조단백(rE4)표체량분별점균체총단백적12.2%화12.8%;SDS-PAGE화Western blot증명rE4단백여표체재체적표첨단백형성상대분자질량약34×103적가용성융합단백(rE4/His).결론성공구건료표체대표첨적융합중조단백(rE4/His)적중조대장간균BL-21/E4표체계통,저위고순도HPV-16 E4단백적제비화상관연구전정료기출.
