药学学报
藥學學報
약학학보
ACTA PHARMACEUTICA SINICA
2006年
8期
721-726
,共6页
陈立敏%吕秋军%SATOSHI Inoue%卞广兴%陈振花%温利青
陳立敏%呂鞦軍%SATOSHI Inoue%卞廣興%陳振花%溫利青
진립민%려추군%SATOSHI Inoue%변엄흥%진진화%온리청
雌激素%雌激素应答序列%分泌型碱性磷酸酶%药物筛选%报告基因%免疫细胞化学
雌激素%雌激素應答序列%分泌型堿性燐痠酶%藥物篩選%報告基因%免疫細胞化學
자격소%자격소응답서렬%분비형감성린산매%약물사선%보고기인%면역세포화학
目的 建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)亚型信号通路的药物筛选模型,以期发现ERβ亚型激动剂.方法 构建带有雌激素应答序列(estrogen responsive element,ERE)靶序列和报告基因的诱导性表达载体pTAL-ERE-SEAP,并将其转入人胚肾(HEK293)细胞中,筛选报告基因分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)表达受雌二醇(17β-estradiol,E2)诱导的阳性克隆.选取相关核受体配体进行模型的特异性考察,同时考察模型的稳定性及时效量效关系,以及免疫细胞化学染色鉴定转染后ERβ的表达情况.利用此模型对本实验室样品库中的2 622个化合物进行筛选.结果 转染pTAL-ERE-SEAP的HEK293细胞中,SEAP报告基因的表达受E2的诱导并呈剂量与时间依赖关系,E2对阳性克隆细胞无增殖作用,本模型的Z'因子值为0.7,免疫细胞化学染色结果表明,转染后ERβ表达、地塞米松以及其他配体的诱导表达率低.结论 利用此模型通过测定SEAP报告基因的诱导表达水平可筛选ERβ亚型激动剂.
目的 建立基于報告基因和雌激素受體β(estrogen receptor β,ERβ)亞型信號通路的藥物篩選模型,以期髮現ERβ亞型激動劑.方法 構建帶有雌激素應答序列(estrogen responsive element,ERE)靶序列和報告基因的誘導性錶達載體pTAL-ERE-SEAP,併將其轉入人胚腎(HEK293)細胞中,篩選報告基因分泌型堿性燐痠酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)錶達受雌二醇(17β-estradiol,E2)誘導的暘性剋隆.選取相關覈受體配體進行模型的特異性攷察,同時攷察模型的穩定性及時效量效關繫,以及免疫細胞化學染色鑒定轉染後ERβ的錶達情況.利用此模型對本實驗室樣品庫中的2 622箇化閤物進行篩選.結果 轉染pTAL-ERE-SEAP的HEK293細胞中,SEAP報告基因的錶達受E2的誘導併呈劑量與時間依賴關繫,E2對暘性剋隆細胞無增殖作用,本模型的Z'因子值為0.7,免疫細胞化學染色結果錶明,轉染後ERβ錶達、地塞米鬆以及其他配體的誘導錶達率低.結論 利用此模型通過測定SEAP報告基因的誘導錶達水平可篩選ERβ亞型激動劑.
목적 건립기우보고기인화자격소수체β(estrogen receptor β,ERβ)아형신호통로적약물사선모형,이기발현ERβ아형격동제.방법 구건대유자격소응답서렬(estrogen responsive element,ERE)파서렬화보고기인적유도성표체재체pTAL-ERE-SEAP,병장기전입인배신(HEK293)세포중,사선보고기인분비형감성린산매(secreted alkaline phosphatase,SEAP)표체수자이순(17β-estradiol,E2)유도적양성극륭.선취상관핵수체배체진행모형적특이성고찰,동시고찰모형적은정성급시효량효관계,이급면역세포화학염색감정전염후ERβ적표체정황.이용차모형대본실험실양품고중적2 622개화합물진행사선.결과 전염pTAL-ERE-SEAP적HEK293세포중,SEAP보고기인적표체수E2적유도병정제량여시간의뢰관계,E2대양성극륭세포무증식작용,본모형적Z'인자치위0.7,면역세포화학염색결과표명,전염후ERβ표체、지새미송이급기타배체적유도표체솔저.결론 이용차모형통과측정SEAP보고기인적유도표체수평가사선ERβ아형격동제.
