毒理学杂志
毒理學雜誌
독이학잡지
JOURNAL OF HEALTH TOXICOLOGY
2007年
1期
4-8
,共5页
神经病靶标酯酶%RNA干涉%表达载体%反向重复序列
神經病靶標酯酶%RNA榦涉%錶達載體%反嚮重複序列
신경병파표지매%RNA간섭%표체재체%반향중복서렬
目的 构建基于通用真核表达载体的人神经病靶标酯酶双链RNA的稳定表达载体.方法 在正义和反义引物两端分别加上EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ的识别位点扩增得到神经病靶标酯酶活力域序列,构建含有目标基因的倒置重复序列的双链RNA表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,酶切分析鉴定重组载体.脂质体法转染到Hela细胞中瞬时表达重组载体,酶活力测定其对细胞内神经病靶标酯酶活力的影响.结果 成功构建了NTE双链RNA稳定表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,表达该载体细胞内NTE活力明显下降至对照细胞的20%左右.结论 采用反向重复序列法将靶标基因的编码序列正反向插入到通用真核细胞表达载体中,是构建哺乳细胞基因双链RNA稳定表达载体的有效方法.
目的 構建基于通用真覈錶達載體的人神經病靶標酯酶雙鏈RNA的穩定錶達載體.方法 在正義和反義引物兩耑分彆加上EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ的識彆位點擴增得到神經病靶標酯酶活力域序列,構建含有目標基因的倒置重複序列的雙鏈RNA錶達載體pcDNA.NTE.dsRNA,酶切分析鑒定重組載體.脂質體法轉染到Hela細胞中瞬時錶達重組載體,酶活力測定其對細胞內神經病靶標酯酶活力的影響.結果 成功構建瞭NTE雙鏈RNA穩定錶達載體pcDNA.NTE.dsRNA,錶達該載體細胞內NTE活力明顯下降至對照細胞的20%左右.結論 採用反嚮重複序列法將靶標基因的編碼序列正反嚮插入到通用真覈細胞錶達載體中,是構建哺乳細胞基因雙鏈RNA穩定錶達載體的有效方法.
목적 구건기우통용진핵표체재체적인신경병파표지매쌍련RNA적은정표체재체.방법 재정의화반의인물량단분별가상EcoR Ⅰ화BamH Ⅰ적식별위점확증득도신경병파표지매활력역서렬,구건함유목표기인적도치중복서렬적쌍련RNA표체재체pcDNA.NTE.dsRNA,매절분석감정중조재체.지질체법전염도Hela세포중순시표체중조재체,매활력측정기대세포내신경병파표지매활력적영향.결과 성공구건료NTE쌍련RNA은정표체재체pcDNA.NTE.dsRNA,표체해재체세포내NTE활력명현하강지대조세포적20%좌우.결론 채용반향중복서렬법장파표기인적편마서렬정반향삽입도통용진핵세포표체재체중,시구건포유세포기인쌍련RNA은정표체재체적유효방법.
