四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2008年
2期
165-168
,共4页
王红仁%王保宁%李婉宜%左凤琼%李虹%蒋忠华%施桥发%李明远
王紅仁%王保寧%李婉宜%左鳳瓊%李虹%蔣忠華%施橋髮%李明遠
왕홍인%왕보저%리완의%좌봉경%리홍%장충화%시교발%리명원
人乳头瘤病毒%宫颈癌%"自杀性"DNA%疫苗%治疗性疫苗%细胞凋亡
人乳頭瘤病毒%宮頸癌%"自殺性"DNA%疫苗%治療性疫苗%細胞凋亡
인유두류병독%궁경암%"자살성"DNA%역묘%치료성역묘%세포조망
目的 构建人乳头瘤病毒 16 型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA 疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用.方法 以 pET32/E7 质粒为模板.用PCR方法扩增 HPV16 E7 基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经 PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染 BHK-21 细胞,然后用免疫荧光技术检测 HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用.结果 PCR 扩增得到约 400 bp 的目的 基因片段,测序结果与 GenBank 中的东亚型 HPV16 E7 基因序列 100%同源.免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7 重组质粒能在 BHK-21 细胞中表达目的 基因.TUNEL 检测证实,pSCA/E7 重组质粒能诱导被转染的 BHK-21 细胞发生凋亡.结论 成功构建 HPV16 E7 基因的重组质粒 pSCA/E7,该重组质粒可在 BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡.
目的 構建人乳頭瘤病毒 16 型(HPV16)E7基因的"自殺性"DNA 疫苗,併研究其體外錶達能力及誘導細胞凋亡作用.方法 以 pET32/E7 質粒為模闆.用PCR方法擴增 HPV16 E7 基因,構建真覈錶達重組質粒pSCA/E7,經 PCR、酶切和測序鑒定正確後,將重組質粒轉染 BHK-21 細胞,然後用免疫熒光技術檢測 HPV16 E7在細胞中的錶達,用dUTP缺口末耑標記技術(TUNEL)進行染色檢測其誘導細胞凋亡作用.結果 PCR 擴增得到約 400 bp 的目的 基因片段,測序結果與 GenBank 中的東亞型 HPV16 E7 基因序列 100%同源.免疫熒光技術檢測證實,pSCA/E7 重組質粒能在 BHK-21 細胞中錶達目的 基因.TUNEL 檢測證實,pSCA/E7 重組質粒能誘導被轉染的 BHK-21 細胞髮生凋亡.結論 成功構建 HPV16 E7 基因的重組質粒 pSCA/E7,該重組質粒可在 BHK-21細胞中錶達,併能誘導被轉染的細胞髮生凋亡.
목적 구건인유두류병독 16 형(HPV16)E7기인적"자살성"DNA 역묘,병연구기체외표체능력급유도세포조망작용.방법 이 pET32/E7 질립위모판.용PCR방법확증 HPV16 E7 기인,구건진핵표체중조질립pSCA/E7,경 PCR、매절화측서감정정학후,장중조질립전염 BHK-21 세포,연후용면역형광기술검측 HPV16 E7재세포중적표체,용dUTP결구말단표기기술(TUNEL)진행염색검측기유도세포조망작용.결과 PCR 확증득도약 400 bp 적목적 기인편단,측서결과여 GenBank 중적동아형 HPV16 E7 기인서렬 100%동원.면역형광기술검측증실,pSCA/E7 중조질립능재 BHK-21 세포중표체목적 기인.TUNEL 검측증실,pSCA/E7 중조질립능유도피전염적 BHK-21 세포발생조망.결론 성공구건 HPV16 E7 기인적중조질립 pSCA/E7,해중조질립가재 BHK-21세포중표체,병능유도피전염적세포발생조망.
