广州中医药大学学报
廣州中醫藥大學學報
엄주중의약대학학보
JOURNAL OF GUANGZHOU UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2009年
6期
598-602,616
,共6页
王静%李茹柳%郭文峰%徐颂芬%羊燕群%高小玲%陈蔚文
王靜%李茹柳%郭文峰%徐頌芬%羊燕群%高小玲%陳蔚文
왕정%리여류%곽문봉%서송분%양연군%고소령%진위문
基因功能%RNA干扰%细胞培养
基因功能%RNA榦擾%細胞培養
기인공능%RNA간우%세포배양
[目的]探索影响大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)RNA干扰效率的转染条件,为进一步以RNA干扰(RNAi)技术构建不同程度表达靶蛋白的细胞模型打下基础.[方法]以24孔培养板培养IEC-6细胞,利用阳离子脂质体转染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测FAM-siRNA和转染试剂Lipofectamine 2000不同剂量比例对转染效率的影响.[结果](1)采用荧光显微镜检测转染效率,以评分进行秩和检验,结果仅有转染试剂或仅有FAM-siRNA或两者均无的组别评分均为0,转染试剂加FAM-siRNA组别均有或强或弱的荧光表达.(2)采用流式细胞仪检测转染效率,以Lipofectamine 2000 1.0μL+FAM-siRNA 160 nmol/L组转染效率最高(平均76.3%),而空白对照组约为1%. [结论]FAM-siRNA 160 nmoL/L(20 μmoL/L、4.8μL,终体积为0.6 mL)+Lipofectamine 2000 1.0μL组合为IEC-6细胞RNA干扰时转染效率最高的转染条件.
[目的]探索影響大鼠小腸上皮細胞(IEC-6)RNA榦擾效率的轉染條件,為進一步以RNA榦擾(RNAi)技術構建不同程度錶達靶蛋白的細胞模型打下基礎.[方法]以24孔培養闆培養IEC-6細胞,利用暘離子脂質體轉染FAM-siRNA片段進入IEC-6細胞,採用熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測FAM-siRNA和轉染試劑Lipofectamine 2000不同劑量比例對轉染效率的影響.[結果](1)採用熒光顯微鏡檢測轉染效率,以評分進行秩和檢驗,結果僅有轉染試劑或僅有FAM-siRNA或兩者均無的組彆評分均為0,轉染試劑加FAM-siRNA組彆均有或彊或弱的熒光錶達.(2)採用流式細胞儀檢測轉染效率,以Lipofectamine 2000 1.0μL+FAM-siRNA 160 nmol/L組轉染效率最高(平均76.3%),而空白對照組約為1%. [結論]FAM-siRNA 160 nmoL/L(20 μmoL/L、4.8μL,終體積為0.6 mL)+Lipofectamine 2000 1.0μL組閤為IEC-6細胞RNA榦擾時轉染效率最高的轉染條件.
[목적]탐색영향대서소장상피세포(IEC-6)RNA간우효솔적전염조건,위진일보이RNA간우(RNAi)기술구건불동정도표체파단백적세포모형타하기출.[방법]이24공배양판배양IEC-6세포,이용양리자지질체전염FAM-siRNA편단진입IEC-6세포,채용형광현미경화류식세포의검측FAM-siRNA화전염시제Lipofectamine 2000불동제량비례대전염효솔적영향.[결과](1)채용형광현미경검측전염효솔,이평분진행질화검험,결과부유전염시제혹부유FAM-siRNA혹량자균무적조별평분균위0,전염시제가FAM-siRNA조별균유혹강혹약적형광표체.(2)채용류식세포의검측전염효솔,이Lipofectamine 2000 1.0μL+FAM-siRNA 160 nmol/L조전염효솔최고(평균76.3%),이공백대조조약위1%. [결론]FAM-siRNA 160 nmoL/L(20 μmoL/L、4.8μL,종체적위0.6 mL)+Lipofectamine 2000 1.0μL조합위IEC-6세포RNA간우시전염효솔최고적전염조건.
