中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
2期
84-95
,共12页
富岩%韩国%杨小楠%富俞淞%邢静%胡俊霞%陈颖%云文琦%于在林
富巖%韓國%楊小楠%富俞淞%邢靜%鬍俊霞%陳穎%雲文琦%于在林
부암%한국%양소남%부유송%형정%호준하%진영%운문기%우재림
干扰素α%血清白蛋白%毕赤酵母%重组融合蛋白质类
榦擾素α%血清白蛋白%畢赤酵母%重組融閤蛋白質類
간우소α%혈청백단백%필적효모%중조융합단백질류
目的 对两种长效干扰素a融合蛋白原料药的理化特性多项指标开展分析和进行比较.方法 利用基因工程技术分别构建了可高效表达重组人血清白蛋白/干扰素a2a融合蛋白(rHSA/IFNa2a)或重组人血清白蛋白/干扰素a2b融合蛋白(rHSA/IFNa2b)的毕赤酵母工程菌.融合蛋白直接分泌到组分简单的无机盐培养基中,并经特别建立的高效分离纯化工艺进行纯化,随后对两个融合蛋白进行详尽的理化特性分析.结果 获得的融合蛋白纯度在98%以上;N端前15个氨基酸序列与理论序列相同;质谱分子量分别为85640.8 D和85781.5 D;圆二色光谱分析比对蛋白空间构象未变:等电点PI约在5.1左右;为非糖基化蛋白;紫外光谱呈典型蛋白质光谱;自由疏基含量测定值为1.4;肽图批次间一致;肽质量指纹图谱可匹配分别达83%和82%;对制备的2个融合蛋白原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源性DNA、甲醇和甘油的残留量检测符合标准要求;融合蛋白的免疫学鉴别为阳性;体外细胞生物比活性约为2.5×10~5IU/mg,并且2个融合蛋白生物比活性测定值无不同,由此,获得了符合临床用药标准的原料药.结论 研究所获得的结果可以作为指导<注射用重组人血清白蛋白/干扰素a2a融合蛋白>和<注射用重组人血清白蛋白了干扰素a2b融合蛋白>2个新药的原料药生产质量标准的建立和检定方法的确定.
目的 對兩種長效榦擾素a融閤蛋白原料藥的理化特性多項指標開展分析和進行比較.方法 利用基因工程技術分彆構建瞭可高效錶達重組人血清白蛋白/榦擾素a2a融閤蛋白(rHSA/IFNa2a)或重組人血清白蛋白/榦擾素a2b融閤蛋白(rHSA/IFNa2b)的畢赤酵母工程菌.融閤蛋白直接分泌到組分簡單的無機鹽培養基中,併經特彆建立的高效分離純化工藝進行純化,隨後對兩箇融閤蛋白進行詳儘的理化特性分析.結果 穫得的融閤蛋白純度在98%以上;N耑前15箇氨基痠序列與理論序列相同;質譜分子量分彆為85640.8 D和85781.5 D;圓二色光譜分析比對蛋白空間構象未變:等電點PI約在5.1左右;為非糖基化蛋白;紫外光譜呈典型蛋白質光譜;自由疏基含量測定值為1.4;肽圖批次間一緻;肽質量指紋圖譜可匹配分彆達83%和82%;對製備的2箇融閤蛋白原料藥中的細菌內毒素、宿主蛋白質、外源性DNA、甲醇和甘油的殘留量檢測符閤標準要求;融閤蛋白的免疫學鑒彆為暘性;體外細胞生物比活性約為2.5×10~5IU/mg,併且2箇融閤蛋白生物比活性測定值無不同,由此,穫得瞭符閤臨床用藥標準的原料藥.結論 研究所穫得的結果可以作為指導<註射用重組人血清白蛋白/榦擾素a2a融閤蛋白>和<註射用重組人血清白蛋白瞭榦擾素a2b融閤蛋白>2箇新藥的原料藥生產質量標準的建立和檢定方法的確定.
목적 대량충장효간우소a융합단백원료약적이화특성다항지표개전분석화진행비교.방법 이용기인공정기술분별구건료가고효표체중조인혈청백단백/간우소a2a융합단백(rHSA/IFNa2a)혹중조인혈청백단백/간우소a2b융합단백(rHSA/IFNa2b)적필적효모공정균.융합단백직접분비도조분간단적무궤염배양기중,병경특별건립적고효분리순화공예진행순화,수후대량개융합단백진행상진적이화특성분석.결과 획득적융합단백순도재98%이상;N단전15개안기산서렬여이론서렬상동;질보분자량분별위85640.8 D화85781.5 D;원이색광보분석비대단백공간구상미변:등전점PI약재5.1좌우;위비당기화단백;자외광보정전형단백질광보;자유소기함량측정치위1.4;태도비차간일치;태질량지문도보가필배분별체83%화82%;대제비적2개융합단백원료약중적세균내독소、숙주단백질、외원성DNA、갑순화감유적잔류량검측부합표준요구;융합단백적면역학감별위양성;체외세포생물비활성약위2.5×10~5IU/mg,병차2개융합단백생물비활성측정치무불동,유차,획득료부합림상용약표준적원료약.결론 연구소획득적결과가이작위지도<주사용중조인혈청백단백/간우소a2a융합단백>화<주사용중조인혈청백단백료간우소a2b융합단백>2개신약적원료약생산질량표준적건립화검정방법적학정.
