CAJ | 학술논문

目的:比较不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性,找出适合作为种子细胞冻存的兔髓核细胞代次.方法:取3～4月龄新西兰大白兔10只,麻醉后在严格无菌条件下分离胸腰椎间盘(T1/2～L7/S1)髓核细胞,体外传代培养,分别取一、二、三、四、五代细胞冻存2～3个月后复苏,取一代未冻存细胞作为对照组(A组,n=10);一、二、三、四、五代冻存后复苏的细胞作为实验组(分别为B、C、D、E、F组,各组n=10),在相同条件下培养2周,培养第2天时采用台盼蓝染色测定细胞成活率;培养第2d、5d、10d、14d时采用MTT法检测细胞生长活性,采用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖(PG)含量;培养第14d时采用阿利新兰染色法测定糖胺聚糖(GAG)合成总量,用RT-PCR法检测各组细胞Ⅱ型胶原基因的表达情况.检测细胞浓度均为1x10(5)个/ml.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果:培养第2d时B、C组细胞成活率接近A组(P>0.05);D、E、F三组细胞成活率明显低于A、B、C组(P<0.05).不同时间点各组细胞均有不同程度的增殖,A、B、C、D四组生长趋势较接近.A、B、C三组相同时间点生长活性比较差异无统计学意义(P>0.05),D组与同一时间点A组比较有显著性差异(P<0.05),E组第10d和第14d以及F组各时间点间比较差异无显著性(P>0.05);A、B、C三组各时间点的PG含量及GAG含量高于相应时间点D、E、F组(P<0.05);A、B、C三组的Ⅱ型胶原基因表达量高于D、E组(P<0.05),明显高于F组(P<0.01).结论:不同代次兔髓核细胞冻存后生物学特性不同,第一、二代细胞冻存后能较好保持髓核细胞特性,可作为种子细胞进行低温保存.
목적:비교불동대차토수핵세포동존후적생물학특성,조출괄합작위충자세포동존적토수핵세포대차.방법:취3～4월령신서란대백토10지,마취후재엄격무균조건하분리흉요추간반(T1/2～L7/S1)수핵세포,체외전대배양,분별취일、이、삼、사、오대세포동존2～3개월후복소,취일대미동존세포작위대조조(A조,n=10);일、이、삼、사、오대동존후복소적세포작위실험조(분별위B、C、D、E、F조,각조n=10),재상동조건하배양2주,배양제2천시채용태반람염색측정세포성활솔;배양제2d、5d、10d、14d시채용MTT법검측세포생장활성,채용간분삼분분광광도법측정단백다당(PG)함량;배양제14d시채용아리신란염색법측정당알취당(GAG)합성총량,용RT-PCR법검측각조세포Ⅱ형효원기인적표체정황.검측세포농도균위1x10(5)개/ml.채용SPSS 13.0연건진행통계학분석.결과:배양제2d시B、C조세포성활솔접근A조(P>0.05);D、E、F삼조세포성활솔명현저우A、B、C조(P<0.05).불동시간점각조세포균유불동정도적증식,A、B、C、D사조생장추세교접근.A、B、C삼조상동시간점생장활성비교차이무통계학의의(P>0.05),D조여동일시간점A조비교유현저성차이(P<0.05),E조제10d화제14d이급F조각시간점간비교차이무현저성(P>0.05);A、B、C삼조각시간점적PG함량급GAG함량고우상응시간점D、E、F조(P<0.05);A、B、C삼조적Ⅱ형효원기인표체량고우D、E조(P<0.05),명현고우F조(P<0.01).결론:불동대차토수핵세포동존후생물학특성불동,제일、이대세포동존후능교호보지수핵세포특성,가작위충자세포진행저온보존.