CAJ | 학술논문

以已知晶体结构的Pseudomonas mesoacidophila MX-45菌株海藻酮糖合成酶(MutB)的晶体结构为模板,在SWISS-MODEL模建立谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)海藻糖合成酶的立体结构,并对初始结构作能量优化,通过氨基酸序列比对,选择TreS-glu保守区内的氨基酸R245、D247、E289、F244和保守区外的氨基酸A288进行定点突变,并对突变酶F244C、F244L、F244W、F244Y、A288G、R245X、E289X、D247N、D247E进行纯化和酶学性质研究,比较突变子对酶活性和热稳定性的影响.结果表明,R245、E289突变为其它的19个氨基酸后酶活力全部丧失,D247E和D247N也丧失酶活,F244C、F244L、F244W、F244Y和A288G的比活力分别降低到TreS-glu的38％、24％、62％、64％和35％,A288突变成T288后没有酶活.与TreS-glu相比,F244C、F244W、A288G的Km值基本不变,F244L、F244Y对底物麦芽糖的亲和力降低,F244Y的最适反应温度和TreSglu相同,均为27℃,而F244C、F244L、F244W和A288G的最适温度提高到32℃.与TreS-glu相比,突变酶的最适反应pH值均有所下降,其中F244C、F244Y和A288G的为7.5,比TreS-glu的8.0均下降了约0.5个单位,而F244L和F244W的为6.5,比TreS-glu的8.0均下降了近1.5个单位.与TreS-glu相比,突变酶的热稳定性均有不同程度提高,其中F244Y、F244W和A288G的Tm值比TreS-glu的提高约1℃,F244L提高约2℃,F244C提高了近4℃.
이이지정체결구적Pseudomonas mesoacidophila MX-45균주해조동당합성매(MutB)적정체결구위모판,재SWISS-MODEL모건립곡안산봉간균(Corynebacterium glutamicum)해조당합성매적입체결구,병대초시결구작능량우화,통과안기산서렬비대,선택TreS-glu보수구내적안기산R245、D247、E289、F244화보수구외적안기산A288진행정점돌변,병대돌변매F244C、F244L、F244W、F244Y、A288G、R245X、E289X、D247N、D247E진행순화화매학성질연구,비교돌변자대매활성화열은정성적영향.결과표명,R245、E289돌변위기타적19개안기산후매활력전부상실,D247E화D247N야상실매활,F244C、F244L、F244W、F244Y화A288G적비활력분별강저도TreS-glu적38％、24％、62％、64％화35％,A288돌변성T288후몰유매활.여TreS-glu상비,F244C、F244W、A288G적Km치기본불변,F244L、F244Y대저물맥아당적친화력강저,F244Y적최괄반응온도화TreSglu상동,균위27℃,이F244C、F244L、F244W화A288G적최괄온도제고도32℃.여TreS-glu상비,돌변매적최괄반응pH치균유소하강,기중F244C、F244Y화A288G적위7.5,비TreS-glu적8.0균하강료약0.5개단위,이F244L화F244W적위6.5,비TreS-glu적8.0균하강료근1.5개단위.여TreS-glu상비,돌변매적열은정성균유불동정도제고,기중F244Y、F244W화A288G적Tm치비TreS-glu적제고약1℃,F244L제고약2℃,F244C제고료근4℃.