结核分枝杆菌Rv3803c、Rv3846基因的克隆、表达、纯化与鉴定
결핵분지간균Rv3803c、Rv3846기인적극륭、표체、순화여감정
Cloning, expression, purification and identification of Rv3803c, Rv3846 gene from Mycobacterium tuberculosis
  • 万方数据
    中国防痨杂志 중국방로잡지
    BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
    2012年 8期 523-526 ,共4页

    孙毅凡%李海成%周杰%钱明%陈涛%江勇%赖赛麟%江振友%钟球%周琳

    손의범%리해성%주걸%전명%진도%강용%뢰새린%강진우%종구%주림

    分枝杆菌,结核%抗原,细菌%细菌蛋白质类%超氧化物歧化酶 分枝桿菌,結覈%抗原,細菌%細菌蛋白質類%超氧化物歧化酶
    분지간균,결핵%항원,세균%세균단백질류%초양화물기화매
    目的 克隆结核分枝杆菌Rv3803c和Rv846基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中进行表达和纯化.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组 DNA为模板,应用PCR方法扩增出Rv803c和R73846基因片段,克隆至pGEX-6P-1表达载体中,测序正确后,在E.coli Rosetta中诱导表达,GST标签亲和层析法纯化蛋白,考马斯亮蓝染色及Western-blot分析鉴定.结果 重组质粒pGEX- Rv3803c、pGEX-R v3846测序表明核苷酸序列与设计完全一致.其在E.coli Rosetta中的存在形式均为可溶部分约50％、包涵体约50％,相对分子质量约为56000和45000,纯化的GST-Rv3803c、GST-Rv3846样品纯度90％以上.完整的GST-Rv3803c的浓度大约为0.1 mg/ml,完整的GST-Rv3846的浓度大约为0.5 mg/ml.即相当于每升E.coli Rasetta培养物中,GST-Rv3803c产量为:0.25mg/L、GST-Rv3846产量为1.25 mg/L.结论 成功获得了纯化蛋白Rv3803c(MPT51)和Rv3846(SodA),为进一步研究MPT-51和SodA蛋白的辅助诊断价值、构建保护性疫苗提供了实验依据.
    목적 극륭결핵분지간균Rv3803c화Rv846기인,병재대장애희균(E.coli)중진행표체화순화.방법 이결핵분지간균H37Rv기인조 DNA위모판,응용PCR방법확증출Rv803c화R73846기인편단,극륭지pGEX-6P-1표체재체중,측서정학후,재E.coli Rosetta중유도표체,GST표첨친화층석법순화단백,고마사량람염색급Western-blot분석감정.결과 중조질립pGEX- Rv3803c、pGEX-R v3846측서표명핵감산서렬여설계완전일치.기재E.coli Rosetta중적존재형식균위가용부분약50％、포함체약50％,상대분자질량약위56000화45000,순화적GST-Rv3803c、GST-Rv3846양품순도90％이상.완정적GST-Rv3803c적농도대약위0.1 mg/ml,완정적GST-Rv3846적농도대약위0.5 mg/ml.즉상당우매승E.coli Rasetta배양물중,GST-Rv3803c산량위:0.25mg/L、GST-Rv3846산량위1.25 mg/L.결론 성공획득료순화단백Rv3803c(MPT51)화Rv3846(SodA),위진일보연구MPT-51화SodA단백적보조진단개치、구건보호성역묘제공료실험의거.
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