昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2005年
1期
18-23
,共6页
巩中军%原国辉%郭线茹%安世恒
鞏中軍%原國輝%郭線茹%安世恆
공중군%원국휘%곽선여%안세항
烟实夜蛾%普通气味结合蛋白%触角%基因克隆%原核表达
煙實夜蛾%普通氣味結閤蛋白%觸角%基因剋隆%原覈錶達
연실야아%보통기미결합단백%촉각%기인극륭%원핵표체
利用RT-PCR技术扩增了编码烟实夜蛾Heltcoverpa assulta雌、雄虫触角普通气味结合蛋白Ⅱ的cDNA片段,将其克隆至pGEM-T Easy载体,获得了普通气味结合蛋白Ⅱ基因成熟蛋白阅读框序列.将该基因重组到表达型质粒pET-30a(+)中,并转化入原核细胞中表达.序列测定结果表明,烟实夜蛾触角普通气味结合蛋白基因的成熟蛋白阅读框全长489 bp,编码162个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为18.2 kD和5.35.推导的氨基酸序列与已报道的10种昆虫普通气味结合蛋白Ⅱ高度同源(73%～98%),并具有气味结合蛋白的典型特征.SDS-PAGE和Western印迹分析表明,经IPTG诱导,普通气味结合蛋白Ⅱ基因能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,电泳检测到一条约23 kD大小的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量大小相应.
利用RT-PCR技術擴增瞭編碼煙實夜蛾Heltcoverpa assulta雌、雄蟲觸角普通氣味結閤蛋白Ⅱ的cDNA片段,將其剋隆至pGEM-T Easy載體,穫得瞭普通氣味結閤蛋白Ⅱ基因成熟蛋白閱讀框序列.將該基因重組到錶達型質粒pET-30a(+)中,併轉化入原覈細胞中錶達.序列測定結果錶明,煙實夜蛾觸角普通氣味結閤蛋白基因的成熟蛋白閱讀框全長489 bp,編碼162箇氨基痠殘基,預測分子量和等電點分彆為18.2 kD和5.35.推導的氨基痠序列與已報道的10種昆蟲普通氣味結閤蛋白Ⅱ高度同源(73%～98%),併具有氣味結閤蛋白的典型特徵.SDS-PAGE和Western印跡分析錶明,經IPTG誘導,普通氣味結閤蛋白Ⅱ基因能在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達,電泳檢測到一條約23 kD大小的外源蛋白,與預測的融閤蛋白分子量大小相應.
이용RT-PCR기술확증료편마연실야아Heltcoverpa assulta자、웅충촉각보통기미결합단백Ⅱ적cDNA편단,장기극륭지pGEM-T Easy재체,획득료보통기미결합단백Ⅱ기인성숙단백열독광서렬.장해기인중조도표체형질립pET-30a(+)중,병전화입원핵세포중표체.서렬측정결과표명,연실야아촉각보통기미결합단백기인적성숙단백열독광전장489 bp,편마162개안기산잔기,예측분자량화등전점분별위18.2 kD화5.35.추도적안기산서렬여이보도적10충곤충보통기미결합단백Ⅱ고도동원(73%～98%),병구유기미결합단백적전형특정.SDS-PAGE화Western인적분석표명,경IPTG유도,보통기미결합단백Ⅱ기인능재대장간균BL21(DE3)중표체,전영검측도일조약23 kD대소적외원단백,여예측적융합단백분자량대소상응.
