中国海洋药物
中國海洋藥物
중국해양약물
CHINESE JOURNAL OF MARINE DRUGS
2007年
2期
1-6
,共6页
李荣贵%赵峰%杨宏%杜桂彩%汪靖超%王斌
李榮貴%趙峰%楊宏%杜桂綵%汪靖超%王斌
리영귀%조봉%양굉%두계채%왕정초%왕빈
沙蚕%溶栓活性蛋白酶%纯化%性质
沙蠶%溶栓活性蛋白酶%純化%性質
사잠%용전활성단백매%순화%성질
目的 表达、纯化重组沙蚕溶栓活性蛋白酶并对其性质进行研究.方法 将表达裁体pMAL-PPA转化入E.coli DH5a构建工程茵,IPTG诱导工程茵大量表达麦芽糖结合蛋白-沙蚕溶栓活性蛋白酶(MBP-PPA),细胞裂解液中融合蛋白经Amylose-resin亲和层析与DEAE-Scpharose FF离子交换层析得到了纯化.用Factor Xa切割融合蛋白后经酪蛋白平板法检测其纤雏蛋白溶酶原激活活性,然后对其部分性质进行了研究.结果 构建了表达MBP-PPA的工程茵,经纯化得到相对分子质量约51kDa的融合蛋白.Factor Xa切割融合蛋白后,重组沙蚕溶栓活性蛋白酶(PPA)体外具有纤维蛋白溶酶原激活活性,性质研究表明PPA热稳定性好,最适pH为8.0,该酶在pH6.0～9.0范围内有较好的稳定性,酶活在有机溶剂中至少维持20d,25mmol·L-1PMSF能完全抑制其活性.结论 证实PPA是一种纤溶酶原激活荆,且将来有望成为一种新型溶辁药物.
目的 錶達、純化重組沙蠶溶栓活性蛋白酶併對其性質進行研究.方法 將錶達裁體pMAL-PPA轉化入E.coli DH5a構建工程茵,IPTG誘導工程茵大量錶達麥芽糖結閤蛋白-沙蠶溶栓活性蛋白酶(MBP-PPA),細胞裂解液中融閤蛋白經Amylose-resin親和層析與DEAE-Scpharose FF離子交換層析得到瞭純化.用Factor Xa切割融閤蛋白後經酪蛋白平闆法檢測其纖雛蛋白溶酶原激活活性,然後對其部分性質進行瞭研究.結果 構建瞭錶達MBP-PPA的工程茵,經純化得到相對分子質量約51kDa的融閤蛋白.Factor Xa切割融閤蛋白後,重組沙蠶溶栓活性蛋白酶(PPA)體外具有纖維蛋白溶酶原激活活性,性質研究錶明PPA熱穩定性好,最適pH為8.0,該酶在pH6.0～9.0範圍內有較好的穩定性,酶活在有機溶劑中至少維持20d,25mmol·L-1PMSF能完全抑製其活性.結論 證實PPA是一種纖溶酶原激活荊,且將來有望成為一種新型溶輇藥物.
목적 표체、순화중조사잠용전활성단백매병대기성질진행연구.방법 장표체재체pMAL-PPA전화입E.coli DH5a구건공정인,IPTG유도공정인대량표체맥아당결합단백-사잠용전활성단백매(MBP-PPA),세포렬해액중융합단백경Amylose-resin친화층석여DEAE-Scpharose FF리자교환층석득도료순화.용Factor Xa절할융합단백후경락단백평판법검측기섬추단백용매원격활활성,연후대기부분성질진행료연구.결과 구건료표체MBP-PPA적공정인,경순화득도상대분자질량약51kDa적융합단백.Factor Xa절할융합단백후,중조사잠용전활성단백매(PPA)체외구유섬유단백용매원격활활성,성질연구표명PPA열은정성호,최괄pH위8.0,해매재pH6.0～9.0범위내유교호적은정성,매활재유궤용제중지소유지20d,25mmol·L-1PMSF능완전억제기활성.결론 증실PPA시일충섬용매원격활형,차장래유망성위일충신형용전약물.
