中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
24期
4773-4776
,共4页
胰岛素生长因子%骨髓基质细胞%成骨细胞%分化
胰島素生長因子%骨髓基質細胞%成骨細胞%分化
이도소생장인자%골수기질세포%성골세포%분화
目的:观察胰岛素生长因子对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的调节作用.方法:实验于2005-11/2006-04在广东医学院附院中心实验室进行.①实验材料:重组胰岛素生长因子(GIBCO),DEME培养基(GIBCO),胰蛋白酶(GIBCO),胎牛血清(杭州四季青),二甲基亚砜(sigma),四甲基偶氮噻唑盐(sigma),碱性磷酸酶试剂盒(长城临床试剂公司),骨钙素试剂盒(天津九鼎).SD大鼠由广东医学院动物部提供.②实验方法:骨髓基质细胞的分离:将SD大鼠处死后,无菌条件下取出动物的双侧股骨和胫骨,分离培养骨髓基质细胞.骨髓基质细胞成骨诱导条件:取第2代骨髓基质细胞,用含体积分数为0.1胎牛血清、50 mg/L维生素C、10 mmol/L β-甘油磷酸钠、10-8 mol/L地塞米松、100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素成骨诱导培养液培养,置37 ℃、体积分数为0.05 CO2饱和湿度培养箱内孵育.倒置显微镜观察细胞生长状况.③实验分组:将第3代骨髓基质细胞随机分为对照组和实验组.细胞增殖实验:取第3代生长良好的骨髓基质细胞,密度调整至4×106 L-1.实验组加入含1,10,20 μg/L胰岛素生长因子诱导培养液,对照组加不含胰岛素生长因子诱导培养液.培养1,3,5,7 d后采用MTT法检测细胞增殖水平.用碱性磷酸酶试剂盒在全自动生化分析仪上测定细胞内碱性磷酸酶活性.④实验评估:采用RI测定上清液中骨钙素含量.观察胰岛素生长因子对骨髓基质细胞增殖和向成骨细胞方向分化的调节作用.结果:①MTT法测骨髓基质细胞增殖情况:与对照组相比,实验组具有明显促进骨髓基质细胞增殖作用(吸光度值:1 d,0.442±0.002,0.498±0.009,0.546±0.004,0.553±0.005;3 d,0.571±0.008,0.604±0.007,0.682±0.006,0.694±0.009;5 d,0.623±0.003,0.659±0.004,0.793±0.008,0.807±0.007;7 d,0.792±0.008,0.810+0.006,0.912±0.003,0.923±0.004,P＜0.05).20 μg/L胰岛素生长因子与10 μg/L胰岛素生长因子组的作用效果差异无显著性意义(P＞0.05).实验组随时间延长,对骨髓基质细胞均有明显促进作用.②骨髓基质细胞内碱性磷酸酶、骨钙素合成的变化:实验组细胞胞浆内碱性磷酸酶明显高于对照组,差异有显著性意义(t=3.08,P＜0.05).实验组细胞胞浆内骨钙素明显升高,是对照组的1.8倍,差异有显著性意义(t=2.82,P＜0.05).结论:适当质量浓度胰岛素生长因子能促进经诱导分化骨髓基质细胞的增殖和向成骨细胞方向的分化.
目的:觀察胰島素生長因子對骨髓基質細胞嚮成骨細胞分化的調節作用.方法:實驗于2005-11/2006-04在廣東醫學院附院中心實驗室進行.①實驗材料:重組胰島素生長因子(GIBCO),DEME培養基(GIBCO),胰蛋白酶(GIBCO),胎牛血清(杭州四季青),二甲基亞砜(sigma),四甲基偶氮噻唑鹽(sigma),堿性燐痠酶試劑盒(長城臨床試劑公司),骨鈣素試劑盒(天津九鼎).SD大鼠由廣東醫學院動物部提供.②實驗方法:骨髓基質細胞的分離:將SD大鼠處死後,無菌條件下取齣動物的雙側股骨和脛骨,分離培養骨髓基質細胞.骨髓基質細胞成骨誘導條件:取第2代骨髓基質細胞,用含體積分數為0.1胎牛血清、50 mg/L維生素C、10 mmol/L β-甘油燐痠鈉、10-8 mol/L地塞米鬆、100 U/mL青黴素、100 U/mL鏈黴素成骨誘導培養液培養,置37 ℃、體積分數為0.05 CO2飽和濕度培養箱內孵育.倒置顯微鏡觀察細胞生長狀況.③實驗分組:將第3代骨髓基質細胞隨機分為對照組和實驗組.細胞增殖實驗:取第3代生長良好的骨髓基質細胞,密度調整至4×106 L-1.實驗組加入含1,10,20 μg/L胰島素生長因子誘導培養液,對照組加不含胰島素生長因子誘導培養液.培養1,3,5,7 d後採用MTT法檢測細胞增殖水平.用堿性燐痠酶試劑盒在全自動生化分析儀上測定細胞內堿性燐痠酶活性.④實驗評估:採用RI測定上清液中骨鈣素含量.觀察胰島素生長因子對骨髓基質細胞增殖和嚮成骨細胞方嚮分化的調節作用.結果:①MTT法測骨髓基質細胞增殖情況:與對照組相比,實驗組具有明顯促進骨髓基質細胞增殖作用(吸光度值:1 d,0.442±0.002,0.498±0.009,0.546±0.004,0.553±0.005;3 d,0.571±0.008,0.604±0.007,0.682±0.006,0.694±0.009;5 d,0.623±0.003,0.659±0.004,0.793±0.008,0.807±0.007;7 d,0.792±0.008,0.810+0.006,0.912±0.003,0.923±0.004,P＜0.05).20 μg/L胰島素生長因子與10 μg/L胰島素生長因子組的作用效果差異無顯著性意義(P＞0.05).實驗組隨時間延長,對骨髓基質細胞均有明顯促進作用.②骨髓基質細胞內堿性燐痠酶、骨鈣素閤成的變化:實驗組細胞胞漿內堿性燐痠酶明顯高于對照組,差異有顯著性意義(t=3.08,P＜0.05).實驗組細胞胞漿內骨鈣素明顯升高,是對照組的1.8倍,差異有顯著性意義(t=2.82,P＜0.05).結論:適噹質量濃度胰島素生長因子能促進經誘導分化骨髓基質細胞的增殖和嚮成骨細胞方嚮的分化.
목적:관찰이도소생장인자대골수기질세포향성골세포분화적조절작용.방법:실험우2005-11/2006-04재엄동의학원부원중심실험실진행.①실험재료:중조이도소생장인자(GIBCO),DEME배양기(GIBCO),이단백매(GIBCO),태우혈청(항주사계청),이갑기아풍(sigma),사갑기우담새서염(sigma),감성린산매시제합(장성림상시제공사),골개소시제합(천진구정).SD대서유엄동의학원동물부제공.②실험방법:골수기질세포적분리:장SD대서처사후,무균조건하취출동물적쌍측고골화경골,분리배양골수기질세포.골수기질세포성골유도조건:취제2대골수기질세포,용함체적분수위0.1태우혈청、50 mg/L유생소C、10 mmol/L β-감유린산납、10-8 mol/L지새미송、100 U/mL청매소、100 U/mL련매소성골유도배양액배양,치37 ℃、체적분수위0.05 CO2포화습도배양상내부육.도치현미경관찰세포생장상황.③실험분조:장제3대골수기질세포수궤분위대조조화실험조.세포증식실험:취제3대생장량호적골수기질세포,밀도조정지4×106 L-1.실험조가입함1,10,20 μg/L이도소생장인자유도배양액,대조조가불함이도소생장인자유도배양액.배양1,3,5,7 d후채용MTT법검측세포증식수평.용감성린산매시제합재전자동생화분석의상측정세포내감성린산매활성.④실험평고:채용RI측정상청액중골개소함량.관찰이도소생장인자대골수기질세포증식화향성골세포방향분화적조절작용.결과:①MTT법측골수기질세포증식정황:여대조조상비,실험조구유명현촉진골수기질세포증식작용(흡광도치:1 d,0.442±0.002,0.498±0.009,0.546±0.004,0.553±0.005;3 d,0.571±0.008,0.604±0.007,0.682±0.006,0.694±0.009;5 d,0.623±0.003,0.659±0.004,0.793±0.008,0.807±0.007;7 d,0.792±0.008,0.810+0.006,0.912±0.003,0.923±0.004,P＜0.05).20 μg/L이도소생장인자여10 μg/L이도소생장인자조적작용효과차이무현저성의의(P＞0.05).실험조수시간연장,대골수기질세포균유명현촉진작용.②골수기질세포내감성린산매、골개소합성적변화:실험조세포포장내감성린산매명현고우대조조,차이유현저성의의(t=3.08,P＜0.05).실험조세포포장내골개소명현승고,시대조조적1.8배,차이유현저성의의(t=2.82,P＜0.05).결론:괄당질량농도이도소생장인자능촉진경유도분화골수기질세포적증식화향성골세포방향적분화.
