生物加工过程
生物加工過程
생물가공과정
CHINESE JOURNAL OF BIOPROCESS ENGINEERING
2008年
3期
68-73
,共6页
付建红%姚斌%杨浩萌%欧阳平凯%石玉瑚
付建紅%姚斌%楊浩萌%歐暘平凱%石玉瑚
부건홍%요빈%양호맹%구양평개%석옥호
大肠杆菌%白地霉ch-3%脂肪酶%基因克隆
大腸桿菌%白地黴ch-3%脂肪酶%基因剋隆
대장간균%백지매ch-3%지방매%기인극륭
构建了白地霉脂肪酶Ⅰ的基因工程菌,为进一步进行蛋白质工程改造和脂肪酶应用奠定了基础.从新疆昌吉市油脂化工厂含油冻土中分离得到1株低温脂肪酶产生菌-白地霉ch-3.该菌发酵上清液中的脂肪酶最适作用温度为35 ℃,在0 ℃仍可保持66 %的相对酶活力.应用PCR技术从白地霉ch-3基因组DNA中克隆得到脂肪酶Ⅰ基因lip1,将该基因与原核表达质粒载体pET-22b(+)连接,构建重组质粒pET-lip1,转化E.coli BL21(DE3),酶切鉴定,筛选得到重组菌.十二烷基磺酸钠-聚丙希酰胺(SDS-PAGE)显示重组脂肪酶Ⅰ的相对分子质量约为5.8×104,酶活为2.73 U/mL,表明lip1基因的表达产物具有正常的生物学活性.白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因lip1能够在大肠杆菌中有效地表达.
構建瞭白地黴脂肪酶Ⅰ的基因工程菌,為進一步進行蛋白質工程改造和脂肪酶應用奠定瞭基礎.從新疆昌吉市油脂化工廠含油凍土中分離得到1株低溫脂肪酶產生菌-白地黴ch-3.該菌髮酵上清液中的脂肪酶最適作用溫度為35 ℃,在0 ℃仍可保持66 %的相對酶活力.應用PCR技術從白地黴ch-3基因組DNA中剋隆得到脂肪酶Ⅰ基因lip1,將該基因與原覈錶達質粒載體pET-22b(+)連接,構建重組質粒pET-lip1,轉化E.coli BL21(DE3),酶切鑒定,篩選得到重組菌.十二烷基磺痠鈉-聚丙希酰胺(SDS-PAGE)顯示重組脂肪酶Ⅰ的相對分子質量約為5.8×104,酶活為2.73 U/mL,錶明lip1基因的錶達產物具有正常的生物學活性.白地黴ch-3脂肪酶Ⅰ基因lip1能夠在大腸桿菌中有效地錶達.
구건료백지매지방매Ⅰ적기인공정균,위진일보진행단백질공정개조화지방매응용전정료기출.종신강창길시유지화공엄함유동토중분리득도1주저온지방매산생균-백지매ch-3.해균발효상청액중적지방매최괄작용온도위35 ℃,재0 ℃잉가보지66 %적상대매활력.응용PCR기술종백지매ch-3기인조DNA중극륭득도지방매Ⅰ기인lip1,장해기인여원핵표체질립재체pET-22b(+)련접,구건중조질립pET-lip1,전화E.coli BL21(DE3),매절감정,사선득도중조균.십이완기광산납-취병희선알(SDS-PAGE)현시중조지방매Ⅰ적상대분자질량약위5.8×104,매활위2.73 U/mL,표명lip1기인적표체산물구유정상적생물학활성.백지매ch-3지방매Ⅰ기인lip1능구재대장간균중유효지표체.
