CAJ | 학술논문

以重组克隆质粒p0390-MF-NASHOR1为模板,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出烟碱酰胺合成酶基因(nas)片段并将其克隆到原核表达载体pGEM-KG中,获得重组表达质粒pKG-NAS.将此重组表达载体质粒转化到大肠杆菌DH5α中,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达.聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiam dodecyI sulfate-poly acryIamide gel electropImresis,SDS-PAGE)结果显示,烟碱酰胺合成酶基因在大肠杆菌中成功表达.表达的烟碱酰胺合成酶融合蛋白分子量大约为61 kDa.将初步的纯化产物作为免疫原去免疫新西兰大白兔制备兔抗烟碱酰胺合成酶血清,用蛋白免疫印迹法(western blot-ting)对制备的兔抗血清中的多克隆抗体进行了鉴定,显示该抗体具有较好的特异性.烟碱酰胺合成酶基因多克隆抗体的成功制备为检测该基因在草坪草中的表达提供了可靠的手段和技术平台,为进一步阐明该基因的作用机理奠定了基础.
이중조극륭질립p0390-MF-NASHOR1위모판,통과취합매련식반응(polymerase chain reaction,PCR)확증출연감선알합성매기인(nas)편단병장기극륭도원핵표체재체pGEM-KG중,획득중조표체질립pKG-NAS.장차중조표체재체질립전화도대장간균DH5α중,경이병기-β-D류대반유당감(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)유도표체.취병희선알응효전영(sodiam dodecyI sulfate-poly acryIamide gel electropImresis,SDS-PAGE)결과현시,연감선알합성매기인재대장간균중성공표체.표체적연감선알합성매융합단백분자량대약위61 kDa.장초보적순화산물작위면역원거면역신서란대백토제비토항연감선알합성매혈청,용단백면역인적법(western blot-ting)대제비적토항혈청중적다극륭항체진행료감정,현시해항체구유교호적특이성.연감선알합성매기인다극륭항체적성공제비위검측해기인재초평초중적표체제공료가고적수단화기술평태,위진일보천명해기인적작용궤리전정료기출.