中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2008年
4期
268-271
,共4页
黄江%胡旭初%吴璇%徐劲%余新炳%包怀恩%郎书源%廖兴江
黃江%鬍旭初%吳璇%徐勁%餘新炳%包懷恩%郎書源%廖興江
황강%호욱초%오선%서경%여신병%포부은%랑서원%료흥강
牛带绦虫亚洲亚种%乳酸脱氧酶基冈%克隆%原核表达
牛帶縚蟲亞洲亞種%乳痠脫氧酶基岡%剋隆%原覈錶達
우대조충아주아충%유산탈양매기강%극륭%원핵표체
目的 对牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因(LDH)进行克隆、表达和免疫原性分析. 方法 将牛带绦虫亚洲亚种成虫TaLDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基硫酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果 均显示重组质粒pET-30a(+)-TaLDH构建成功.SDS-PAGE结果 表明,目的 基冈在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白,浓度为0.9 mg/ml.Western blotting分析结果 显示,重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH能识别感染牛带绦虫亚洲亚种的猪血清和患者血清,在相对分子质量(Mr) 35 000处有一清晰条带,表明其具有免疫反应性.结论 牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达.
目的 對牛帶縚蟲亞洲亞種成蟲乳痠脫氫酶基因(LDH)進行剋隆、錶達和免疫原性分析. 方法 將牛帶縚蟲亞洲亞種成蟲TaLDH剋隆到原覈錶達質粒pET-30a(+)中,在大腸埃希菌BL-21/DE3中用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,錶達產物通過十二烷基硫痠鈉.聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定,用鎳離子金屬螯閤劑親和層析柱進行純化,純化的重組蛋白pET-30a(+)-TaLDH用蛋白質印跡(Western blotting)分析其免疫原性.結果 PCR、雙酶切及DNA測序結果 均顯示重組質粒pET-30a(+)-TaLDH構建成功.SDS-PAGE結果 錶明,目的 基岡在大腸埃希菌BL-21/DE3中穫得高效錶達,經親和層析穫得瞭高純度蛋白,濃度為0.9 mg/ml.Western blotting分析結果 顯示,重組蛋白pET-30a(+)-TaLDH能識彆感染牛帶縚蟲亞洲亞種的豬血清和患者血清,在相對分子質量(Mr) 35 000處有一清晰條帶,錶明其具有免疫反應性.結論 牛帶縚蟲亞洲亞種成蟲乳痠脫氫酶基因可在原覈錶達繫統中穫得具有免疫學活性的高效錶達.
목적 대우대조충아주아충성충유산탈경매기인(LDH)진행극륭、표체화면역원성분석. 방법 장우대조충아주아충성충TaLDH극륭도원핵표체질립pET-30a(+)중,재대장애희균BL-21/DE3중용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,표체산물통과십이완기류산납.취병희선알응효전영(SDS-PAGE)진행감정,용얼리자금속오합제친화층석주진행순화,순화적중조단백pET-30a(+)-TaLDH용단백질인적(Western blotting)분석기면역원성.결과 PCR、쌍매절급DNA측서결과 균현시중조질립pET-30a(+)-TaLDH구건성공.SDS-PAGE결과 표명,목적 기강재대장애희균BL-21/DE3중획득고효표체,경친화층석획득료고순도단백,농도위0.9 mg/ml.Western blotting분석결과 현시,중조단백pET-30a(+)-TaLDH능식별감염우대조충아주아충적저혈청화환자혈청,재상대분자질량(Mr) 35 000처유일청석조대,표명기구유면역반응성.결론 우대조충아주아충성충유산탈경매기인가재원핵표체계통중획득구유면역학활성적고효표체.
