重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2009年
1期
6-8
,共3页
马仕坤%钟立%程庆丰%李卫平%青华%李启富
馬仕坤%鐘立%程慶豐%李衛平%青華%李啟富
마사곤%종립%정경봉%리위평%청화%리계부
PGC1α%腺病毒载体%同源重组
PGC1α%腺病毒載體%同源重組
PGC1α%선병독재체%동원중조
目的:构建编码小鼠PGC1α基因的重组腺病毒载体.为进一步研究其蛋白功能提供工具.方法:穿梭质粒pAdTrack-CMV-PGC1α线性化后与骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183菌中完成同源重组,筛选并提取重组正确的腺病毒质粒,PacI线性化,脂质体转染293细胞包装出成熟的具有感染活力的腺病毒颗粒,TCID50法测定病毒滴度,Western bloting检测PGC1α蛋白在293细胞的表达.结果:测序及酶切鉴定表明目的基因正确插人穿梭质粒,读码框未发生移位.重组腺病毒扩增后滴度约3×1010TCID50/ml,能在293细胞中表达PGC1α蛋白.结论:利用细菌内同源重组的方法成功构建了编码小鼠PGC1α基因的重组腺病毒载体,并观察到其蛋白表达.
目的:構建編碼小鼠PGC1α基因的重組腺病毒載體.為進一步研究其蛋白功能提供工具.方法:穿梭質粒pAdTrack-CMV-PGC1α線性化後與骨架質粒pAdeasy-1在BJ5183菌中完成同源重組,篩選併提取重組正確的腺病毒質粒,PacI線性化,脂質體轉染293細胞包裝齣成熟的具有感染活力的腺病毒顆粒,TCID50法測定病毒滴度,Western bloting檢測PGC1α蛋白在293細胞的錶達.結果:測序及酶切鑒定錶明目的基因正確插人穿梭質粒,讀碼框未髮生移位.重組腺病毒擴增後滴度約3×1010TCID50/ml,能在293細胞中錶達PGC1α蛋白.結論:利用細菌內同源重組的方法成功構建瞭編碼小鼠PGC1α基因的重組腺病毒載體,併觀察到其蛋白錶達.
목적:구건편마소서PGC1α기인적중조선병독재체.위진일보연구기단백공능제공공구.방법:천사질립pAdTrack-CMV-PGC1α선성화후여골가질립pAdeasy-1재BJ5183균중완성동원중조,사선병제취중조정학적선병독질립,PacI선성화,지질체전염293세포포장출성숙적구유감염활력적선병독과립,TCID50법측정병독적도,Western bloting검측PGC1α단백재293세포적표체.결과:측서급매절감정표명목적기인정학삽인천사질립,독마광미발생이위.중조선병독확증후적도약3×1010TCID50/ml,능재293세포중표체PGC1α단백.결론:이용세균내동원중조적방법성공구건료편마소서PGC1α기인적중조선병독재체,병관찰도기단백표체.
