上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2010年
3期
314-317
,共4页
乙酰肝素酶%启动子%肿瘤%基因治疗%载体
乙酰肝素酶%啟動子%腫瘤%基因治療%載體
을선간소매%계동자%종류%기인치료%재체
目的 构建人乙酰肝素酶(HPSE)基因启动子驱动的肿瘤细胞特异性表达载体,并分析其活性.方法 PCR扩增人类基因组DNA HPSE启动子核心片段,并测序鉴定和分析转录因子结合位点(TFBS).双酶切插入pEGFP-1的多克隆位点,构建肿瘤细胞表达载体pEGFP-Hp.将经酶切和测序鉴定的重组质粒pEGFP-Hp及质粒pEGFP-1(阴性对照)和pEGFP-N1(阳性对照)分别转染正常人脐静脉内皮细胞(ECV)和不同的肿瘤细胞(肝癌细胞HepG2、喉癌上皮细胞Hep2和慢性自血病K562细胞).荧光显微镜观察和流式细胞术分析其促转录活性.结果 扩增的HPSE启动子核心片段长度为561 bp,序列分析与GenBank收录一致,含有3个SP1、4个Ets相关元件、2个早期生长反应基因-1及E47、N-myc和NGFI-p300等TFBS各1个.重组质粒pEGFP-HP经酶切和测序鉴定与预期结果 一致.荧光显微镜观察显示,转染pEGFP-1细胞中均无荧光表达;转染pEGFP-N1细胞均有强荧光表达;转染pEGFP-Hp质粒的ECV几乎无荧光表达,HepG2和Hep2细胞有较强荧光,K562细胞仅有较弱荧光.流式细胞术检测表明,pEGFP-Hp在ECV、HepG2、Hep2和K562细胞的平均转染率分别为3.9%、21.3%、10.8%和6.5%,pEGFP-N1转染率分别为17.1%、24.0%、14.0%和11.0%,二者比值均小于1.结论 成功构建了由HPSE核心启动子驱动的真核细胞表达载体.该载体可在肿瘤细胞特异性表达,但其活性需进一步加强.
目的 構建人乙酰肝素酶(HPSE)基因啟動子驅動的腫瘤細胞特異性錶達載體,併分析其活性.方法 PCR擴增人類基因組DNA HPSE啟動子覈心片段,併測序鑒定和分析轉錄因子結閤位點(TFBS).雙酶切插入pEGFP-1的多剋隆位點,構建腫瘤細胞錶達載體pEGFP-Hp.將經酶切和測序鑒定的重組質粒pEGFP-Hp及質粒pEGFP-1(陰性對照)和pEGFP-N1(暘性對照)分彆轉染正常人臍靜脈內皮細胞(ECV)和不同的腫瘤細胞(肝癌細胞HepG2、喉癌上皮細胞Hep2和慢性自血病K562細胞).熒光顯微鏡觀察和流式細胞術分析其促轉錄活性.結果 擴增的HPSE啟動子覈心片段長度為561 bp,序列分析與GenBank收錄一緻,含有3箇SP1、4箇Ets相關元件、2箇早期生長反應基因-1及E47、N-myc和NGFI-p300等TFBS各1箇.重組質粒pEGFP-HP經酶切和測序鑒定與預期結果 一緻.熒光顯微鏡觀察顯示,轉染pEGFP-1細胞中均無熒光錶達;轉染pEGFP-N1細胞均有彊熒光錶達;轉染pEGFP-Hp質粒的ECV幾乎無熒光錶達,HepG2和Hep2細胞有較彊熒光,K562細胞僅有較弱熒光.流式細胞術檢測錶明,pEGFP-Hp在ECV、HepG2、Hep2和K562細胞的平均轉染率分彆為3.9%、21.3%、10.8%和6.5%,pEGFP-N1轉染率分彆為17.1%、24.0%、14.0%和11.0%,二者比值均小于1.結論 成功構建瞭由HPSE覈心啟動子驅動的真覈細胞錶達載體.該載體可在腫瘤細胞特異性錶達,但其活性需進一步加彊.
목적 구건인을선간소매(HPSE)기인계동자구동적종류세포특이성표체재체,병분석기활성.방법 PCR확증인류기인조DNA HPSE계동자핵심편단,병측서감정화분석전록인자결합위점(TFBS).쌍매절삽입pEGFP-1적다극륭위점,구건종류세포표체재체pEGFP-Hp.장경매절화측서감정적중조질립pEGFP-Hp급질립pEGFP-1(음성대조)화pEGFP-N1(양성대조)분별전염정상인제정맥내피세포(ECV)화불동적종류세포(간암세포HepG2、후암상피세포Hep2화만성자혈병K562세포).형광현미경관찰화류식세포술분석기촉전록활성.결과 확증적HPSE계동자핵심편단장도위561 bp,서렬분석여GenBank수록일치,함유3개SP1、4개Ets상관원건、2개조기생장반응기인-1급E47、N-myc화NGFI-p300등TFBS각1개.중조질립pEGFP-HP경매절화측서감정여예기결과 일치.형광현미경관찰현시,전염pEGFP-1세포중균무형광표체;전염pEGFP-N1세포균유강형광표체;전염pEGFP-Hp질립적ECV궤호무형광표체,HepG2화Hep2세포유교강형광,K562세포부유교약형광.류식세포술검측표명,pEGFP-Hp재ECV、HepG2、Hep2화K562세포적평균전염솔분별위3.9%、21.3%、10.8%화6.5%,pEGFP-N1전염솔분별위17.1%、24.0%、14.0%화11.0%,이자비치균소우1.결론 성공구건료유HPSE핵심계동자구동적진핵세포표체재체.해재체가재종류세포특이성표체,단기활성수진일보가강.
