南京大学学报(自然科学版)
南京大學學報(自然科學版)
남경대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY
2001年
2期
218-222
,共5页
陈浩%陈于红%张菁%刘建宁%朱德煦
陳浩%陳于紅%張菁%劉建寧%硃德煦
진호%진우홍%장정%류건저%주덕후
血管生成抑制素,kringle 5,包涵体,变复性
血管生成抑製素,kringle 5,包涵體,變複性
혈관생성억제소,kringle 5,포함체,변복성
根据人纤溶酶原的cDNA序列,利用PCR技术获得人纤溶酶原Kringle5结构域的基因,并将其克隆至表达质粒pET25b(+)中.重组载体pET25b(+)/kringle5转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,在12kD处可见明显的表达条带,表达产物大部分以无活性的包涵体形式存在.包涵体经过体外变复性,SP-SepharoseFF离子交换柱一步纯化,15%SDSPAGE鉴定考染一条带,纯度达95%以上.所得到的目标蛋白能明显的抑制bFGF诱导的牛毛细血管内皮细胞增生.
根據人纖溶酶原的cDNA序列,利用PCR技術穫得人纖溶酶原Kringle5結構域的基因,併將其剋隆至錶達質粒pET25b(+)中.重組載體pET25b(+)/kringle5轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中,經IPTG誘導錶達,在12kD處可見明顯的錶達條帶,錶達產物大部分以無活性的包涵體形式存在.包涵體經過體外變複性,SP-SepharoseFF離子交換柱一步純化,15%SDSPAGE鑒定攷染一條帶,純度達95%以上.所得到的目標蛋白能明顯的抑製bFGF誘導的牛毛細血管內皮細胞增生.
근거인섬용매원적cDNA서렬,이용PCR기술획득인섬용매원Kringle5결구역적기인,병장기극륭지표체질립pET25b(+)중.중조재체pET25b(+)/kringle5전화지대장간균BL21(DE3)중,경IPTG유도표체,재12kD처가견명현적표체조대,표체산물대부분이무활성적포함체형식존재.포함체경과체외변복성,SP-SepharoseFF리자교환주일보순화,15%SDSPAGE감정고염일조대,순도체95%이상.소득도적목표단백능명현적억제bFGF유도적우모세혈관내피세포증생.
