南通大学学报(医学版)
南通大學學報(醫學版)
남통대학학보(의학판)
JOURNAL OF NANTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2008年
3期
157-160,164
,共5页
史群芳%杨世蕊%雷陈%孟祥勋%黄超群%王明华
史群芳%楊世蕊%雷陳%孟祥勛%黃超群%王明華
사군방%양세예%뢰진%맹상훈%황초군%왕명화
ZNFD基因%锌指%原核表达%免疫抗原%多克隆抗体%聚合酶链反应
ZNFD基因%鋅指%原覈錶達%免疫抗原%多剋隆抗體%聚閤酶鏈反應
ZNFD기인%자지%원핵표체%면역항원%다극륭항체%취합매련반응
目的:PCR扩增得到新基因ZNFD(Znf domain containing protein),构建pET32a-ZNFD原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体.方法:通过PCR的方法克隆新基因ZNFD,选取部分抗原免疫原性较高的部分ORF序列,克隆到原核表达载体pET32a上,利用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)表达系统表达ZNFD融合蛋白.纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体.通过琼脂糖双向扩散实验和Western blot鉴定其效价和特异性.结果:经测序鉴定已成功克隆ZNFD基因.通过构建原核表达载体pET32a-ZNFD,在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中使用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约为45 kD的融合蛋白.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫特异性.结论:得到纯化的ZNFD蛋白,制备的多克隆抗体达到了一定的效价,且具有高特异性,为进一步研究ZNFD的功能奠定了实验基础.
目的:PCR擴增得到新基因ZNFD(Znf domain containing protein),構建pET32a-ZNFD原覈錶達載體,誘導蛋白錶達及製備多剋隆抗體.方法:通過PCR的方法剋隆新基因ZNFD,選取部分抗原免疫原性較高的部分ORF序列,剋隆到原覈錶達載體pET32a上,利用大腸桿菌Rosetta-gami(DE3)錶達繫統錶達ZNFD融閤蛋白.純化目的蛋白免疫傢兔,製備多剋隆抗體.通過瓊脂糖雙嚮擴散實驗和Western blot鑒定其效價和特異性.結果:經測序鑒定已成功剋隆ZNFD基因.通過構建原覈錶達載體pET32a-ZNFD,在大腸桿菌Rosetta-gami(DE3)中使用IPTG誘導錶達,得到相對分子質量約為45 kD的融閤蛋白.純化蛋白免疫傢兔,製備的多剋隆抗體具有較彊的免疫特異性.結論:得到純化的ZNFD蛋白,製備的多剋隆抗體達到瞭一定的效價,且具有高特異性,為進一步研究ZNFD的功能奠定瞭實驗基礎.
목적:PCR확증득도신기인ZNFD(Znf domain containing protein),구건pET32a-ZNFD원핵표체재체,유도단백표체급제비다극륭항체.방법:통과PCR적방법극륭신기인ZNFD,선취부분항원면역원성교고적부분ORF서렬,극륭도원핵표체재체pET32a상,이용대장간균Rosetta-gami(DE3)표체계통표체ZNFD융합단백.순화목적단백면역가토,제비다극륭항체.통과경지당쌍향확산실험화Western blot감정기효개화특이성.결과:경측서감정이성공극륭ZNFD기인.통과구건원핵표체재체pET32a-ZNFD,재대장간균Rosetta-gami(DE3)중사용IPTG유도표체,득도상대분자질량약위45 kD적융합단백.순화단백면역가토,제비적다극륭항체구유교강적면역특이성.결론:득도순화적ZNFD단백,제비적다극륭항체체도료일정적효개,차구유고특이성,위진일보연구ZNFD적공능전정료실험기출.
