生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
506-508
,共3页
赵慧%刘忠钰%秦成峰%秦鄂德
趙慧%劉忠鈺%秦成峰%秦鄂德
조혜%류충옥%진성봉%진악덕
登革病毒%非结构蛋白NS4B%真核表达
登革病毒%非結構蛋白NS4B%真覈錶達
등혁병독%비결구단백NS4B%진핵표체
目的:构建登革2型病毒非结构蛋白NS4B及其突变体A2K-NS4B基因的真核载体,并观察二者在哺乳动物细胞内的定位情况.方法:从登革2型病毒43株的全长cDNA克隆载体上扩增获得编码NS4B及缺失2K片段的NS4B突变体△2K-NS4B的基因;通过基因重组的方法分别将2段基因克隆入真核表达载体pcDNA6/V5-HisA,获得重组真核表达载体pc/D2-NS4B和pc/D2-A2K-NS4B;经脂质体法转染BHK-21细胞后,用RT-PCR、间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达的蛋白.结果:重组蛋白D2-NS4B和D2-△2K-NS4B可在BHK-21细胞中表达,二者均定位于细胞质中,并具有较好的抗原性,能够被抗登革2型病毒NS4B的多克隆抗体特异识别.结论:重组蛋白D2-NS4B和D2-A2K-NS4B在哺乳动物细胞胞质中的正确表达,为深入了解NS4B在登革病毒致病过程中的生物学功能奠定了基础.
目的:構建登革2型病毒非結構蛋白NS4B及其突變體A2K-NS4B基因的真覈載體,併觀察二者在哺乳動物細胞內的定位情況.方法:從登革2型病毒43株的全長cDNA剋隆載體上擴增穫得編碼NS4B及缺失2K片段的NS4B突變體△2K-NS4B的基因;通過基因重組的方法分彆將2段基因剋隆入真覈錶達載體pcDNA6/V5-HisA,穫得重組真覈錶達載體pc/D2-NS4B和pc/D2-A2K-NS4B;經脂質體法轉染BHK-21細胞後,用RT-PCR、間接免疫熒光和Western印跡鑒定錶達的蛋白.結果:重組蛋白D2-NS4B和D2-△2K-NS4B可在BHK-21細胞中錶達,二者均定位于細胞質中,併具有較好的抗原性,能夠被抗登革2型病毒NS4B的多剋隆抗體特異識彆.結論:重組蛋白D2-NS4B和D2-A2K-NS4B在哺乳動物細胞胞質中的正確錶達,為深入瞭解NS4B在登革病毒緻病過程中的生物學功能奠定瞭基礎.
목적:구건등혁2형병독비결구단백NS4B급기돌변체A2K-NS4B기인적진핵재체,병관찰이자재포유동물세포내적정위정황.방법:종등혁2형병독43주적전장cDNA극륭재체상확증획득편마NS4B급결실2K편단적NS4B돌변체△2K-NS4B적기인;통과기인중조적방법분별장2단기인극륭입진핵표체재체pcDNA6/V5-HisA,획득중조진핵표체재체pc/D2-NS4B화pc/D2-A2K-NS4B;경지질체법전염BHK-21세포후,용RT-PCR、간접면역형광화Western인적감정표체적단백.결과:중조단백D2-NS4B화D2-△2K-NS4B가재BHK-21세포중표체,이자균정위우세포질중,병구유교호적항원성,능구피항등혁2형병독NS4B적다극륭항체특이식별.결론:중조단백D2-NS4B화D2-A2K-NS4B재포유동물세포포질중적정학표체,위심입료해NS4B재등혁병독치병과정중적생물학공능전정료기출.
