生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2010年
3期
23-25
,共3页
史继静%刘朝奇%李斌%覃晓玲%任东明
史繼靜%劉朝奇%李斌%覃曉玲%任東明
사계정%류조기%리빈%담효령%임동명
人PD1胞外段基因%原核表达%免疫原性%多克隆抗体
人PD1胞外段基因%原覈錶達%免疫原性%多剋隆抗體
인PD1포외단기인%원핵표체%면역원성%다극륭항체
目的:研究人PD1的生物学活性,制备人PD1胞外段区域及其特异性抗体.方法:用PCR方法扩增编码人PD1胞外段的基因序列(hPD1 ecr),将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白用SDS -PAGE和Western blot鉴定.纯化目的蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),流式细胞术检测抗体滴度及其特异性.结果:原核表达载体pET28 a(+)-PD1 ecr成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PD1胞外区蛋经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确.用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论:得到纯化的人PD1胞外蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下人PD1蛋白,为进一步研究PD1功能奠
目的:研究人PD1的生物學活性,製備人PD1胞外段區域及其特異性抗體.方法:用PCR方法擴增編碼人PD1胞外段的基因序列(hPD1 ecr),將其剋隆到原覈錶達載體pET28a(+)中,併轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,錶達蛋白用SDS -PAGE和Western blot鑒定.純化目的蛋白免疫日本大耳白兔,製備多剋隆抗體.通過酶聯免疫吸附實驗(ELISA),流式細胞術檢測抗體滴度及其特異性.結果:原覈錶達載體pET28 a(+)-PD1 ecr成功構建,併可在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,得到的PD1胞外區蛋經SDS-PAGE和Western blot鑒定正確.用純化蛋白免疫日本大耳白兔,製備的多剋隆抗體具有較彊免疫特異性.結論:得到純化的人PD1胞外蛋白,製備的多剋隆抗體能夠檢測自然狀態下人PD1蛋白,為進一步研究PD1功能奠
목적:연구인PD1적생물학활성,제비인PD1포외단구역급기특이성항체.방법:용PCR방법확증편마인PD1포외단적기인서렬(hPD1 ecr),장기극륭도원핵표체재체pET28a(+)중,병전화지대장간균BL21(DE3)중유도표체,표체단백용SDS -PAGE화Western blot감정.순화목적단백면역일본대이백토,제비다극륭항체.통과매련면역흡부실험(ELISA),류식세포술검측항체적도급기특이성.결과:원핵표체재체pET28 a(+)-PD1 ecr성공구건,병가재대장간균BL21(DE3)중유도표체,득도적PD1포외구단경SDS-PAGE화Western blot감정정학.용순화단백면역일본대이백토,제비적다극륭항체구유교강면역특이성.결론:득도순화적인PD1포외단백,제비적다극륭항체능구검측자연상태하인PD1단백,위진일보연구PD1공능전
