拮抗型抗hTNF-α单克隆抗体的筛选和活性鉴定
길항형항hTNF-α단극륭항체적사선화활성감정
Screening and identification of antagonistic monoclonal antibodies against hTNF-α
  • 万方数据
    山东医药 산동의약
    SHANDONG MEDICAL JOURNAL
    2010年 23期 13-16 ,共4页

    黄蕊%马莉%谷岳%谢印良%佘鸣%邵晓枫%熊冬生%刘汉芝%许元富

    황예%마리%곡악%사인량%사명%소효풍%웅동생%류한지%허원부

    人肿瘤坏死因子-α%单克隆抗体%细胞凋亡%细胞毒性%拮抗剂 人腫瘤壞死因子-α%單剋隆抗體%細胞凋亡%細胞毒性%拮抗劑
    인종류배사인자-α%단극륭항체%세포조망%세포독성%길항제
    目的 制备和筛选拮抗型人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)单克隆抗体(McAb)并检测其活性,为临床靶向治疗提供理论依据.方法 用经典免疫方法获得抗hTNF-α McAb,经接种于小鼠腹腔后获得腹水,采用硫酸铵沉淀和蛋白G亲和层析法纯化得到纯度>95%的抗hTNF-α McAb,采用ELISA方法测定效价、抗体亚型和亲和力,MTT法测定抗体阻断hTNF-α对L929细胞的细胞毒作用和筛选拮抗型抗hTNF-α McAb,流式细胞仪法测定抗体阻断hTNF-α诱导L929细胞凋亡的作用.结果 获得1株能稳定分泌抗hTNF-α McAb的杂交瘤细胞株XB10,分泌的抗体亚型为IgG2b;该抗体能高亲和性与hTNF-α结合,特异性阻断hTNF-α对L929细胞的细胞毒作用和抑制细胞凋亡,并呈一定剂量依赖性.结论 成功制备能稳定分泌拮抗型抗hTNF-α的McAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体对hTNF-α有特异性拮抗作用,为今后研制临床治疗型抗hTNF-α的基因工程抗体奠定了实验基础.
    목적 제비화사선길항형인종류배사인자-α(hTNF-α)단극륭항체(McAb)병검측기활성,위림상파향치료제공이론의거.방법 용경전면역방법획득항hTNF-α McAb,경접충우소서복강후획득복수,채용류산안침정화단백G친화층석법순화득도순도>95%적항hTNF-α McAb,채용ELISA방법측정효개、항체아형화친화력,MTT법측정항체조단hTNF-α대L929세포적세포독작용화사선길항형항hTNF-α McAb,류식세포의법측정항체조단hTNF-α유도L929세포조망적작용.결과 획득1주능은정분비항hTNF-α McAb적잡교류세포주XB10,분비적항체아형위IgG2b;해항체능고친화성여hTNF-α결합,특이성조단hTNF-α대L929세포적세포독작용화억제세포조망,병정일정제량의뢰성.결론 성공제비능은정분비길항형항hTNF-α적McAb적잡교류세포주,기분비적항체대hTNF-α유특이성길항작용,위금후연제림상치료형항hTNF-α적기인공정항체전정료실험기출.
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