中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2011年
6期
456-460
,共5页
宁方勇%王春生%张秋婷%安星兰%朴善花%安铁洙
寧方勇%王春生%張鞦婷%安星蘭%樸善花%安鐵洙
저방용%왕춘생%장추정%안성란%박선화%안철수
ICR小鼠%Lin28%克隆%原核表达
ICR小鼠%Lin28%剋隆%原覈錶達
ICR소서%Lin28%극륭%원핵표체
目的 探讨获取小鼠Lin28蛋白的方法.方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点(Nco Ⅰ及Xho Ⅰ)引物,从该cDNA中扩增出Lin28基因编码区序列；将获得的Lin28基因编码区序列克隆到pMD18-T载体上.对质粒双酶切回收其中Lin28基因片段,与pET-30a(+)载体相连接并转化Rosetta( DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对表达结果进行分析.结果 对所克隆的Lin28蛋白编码区的DNA序列分析表明,Lin28 CDS区包括终止密码子在内为630 bp,与参照DNA( NM_145833)相比同源性为99.37％,与参照氨基酸序列相比同源性为100％；在IPTG诱导下pET-30a(+)-Lin28重组质粒可表达与预期相符的约为27.5×103的蛋白质.结论 利用克隆的小鼠Lin28基因,采用原核表达方法,成功获得小鼠Lin28蛋白,为进一步开展以重组蛋白诱导体细胞重编程研究奠定基础.
目的 探討穫取小鼠Lin28蛋白的方法.方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA後反轉錄為cDNA序列,用一對兩耑引入特定酶切位點(Nco Ⅰ及Xho Ⅰ)引物,從該cDNA中擴增齣Lin28基因編碼區序列；將穫得的Lin28基因編碼區序列剋隆到pMD18-T載體上.對質粒雙酶切迴收其中Lin28基因片段,與pET-30a(+)載體相連接併轉化Rosetta( DE3)型大腸桿菌,用IPTG誘導錶達,最後採用SDS-PAGE對錶達結果進行分析.結果 對所剋隆的Lin28蛋白編碼區的DNA序列分析錶明,Lin28 CDS區包括終止密碼子在內為630 bp,與參照DNA( NM_145833)相比同源性為99.37％,與參照氨基痠序列相比同源性為100％；在IPTG誘導下pET-30a(+)-Lin28重組質粒可錶達與預期相符的約為27.5×103的蛋白質.結論 利用剋隆的小鼠Lin28基因,採用原覈錶達方法,成功穫得小鼠Lin28蛋白,為進一步開展以重組蛋白誘導體細胞重編程研究奠定基礎.
목적 탐토획취소서Lin28단백적방법.방법 제취8.5 d ICR소서배태mRNA후반전록위cDNA서렬,용일대량단인입특정매절위점(Nco Ⅰ급Xho Ⅰ)인물,종해cDNA중확증출Lin28기인편마구서렬；장획득적Lin28기인편마구서렬극륭도pMD18-T재체상.대질립쌍매절회수기중Lin28기인편단,여pET-30a(+)재체상련접병전화Rosetta( DE3)형대장간균,용IPTG유도표체,최후채용SDS-PAGE대표체결과진행분석.결과 대소극륭적Lin28단백편마구적DNA서렬분석표명,Lin28 CDS구포괄종지밀마자재내위630 bp,여삼조DNA( NM_145833)상비동원성위99.37％,여삼조안기산서렬상비동원성위100％；재IPTG유도하pET-30a(+)-Lin28중조질립가표체여예기상부적약위27.5×103적단백질.결론 이용극륭적소서Lin28기인,채용원핵표체방법,성공획득소서Lin28단백,위진일보개전이중조단백유도체세포중편정연구전정기출.
