浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2012年
4期
359-365
,共7页
梁星光%吴博文%张维晨%周立民%朱丹雁%楼宜嘉
樑星光%吳博文%張維晨%週立民%硃丹雁%樓宜嘉
량성광%오박문%장유신%주립민%주단안%루의가
Junctophilin 1%胚胎干细胞%连接蛋白类%心肌/生长和发育%心肌/细胞学%细胞分化%定向分化%大鼠胚胎%心肌发生
Junctophilin 1%胚胎榦細胞%連接蛋白類%心肌/生長和髮育%心肌/細胞學%細胞分化%定嚮分化%大鼠胚胎%心肌髮生
Junctophilin 1%배태간세포%련접단백류%심기/생장화발육%심기/세포학%세포분화%정향분화%대서배태%심기발생
目的:评价膜连接蛋白Junctophilin 1 (JP1)亚型在哺乳动物心肌发生过程中,基因转录和蛋白表达特征,为心肌发育生物学及心脏再生医学相关生命现象本质提供实验依据.方法:小鼠胚胎于( embryonic stem,ES)细胞相继制成单细胞悬液和悬滴,收集拟胚体转至培养皿中悬浮分化培养.每隔2d收集细胞供分子生物学评价,并于心肌分化成熟期(第17天),免疫荧光成像原位检测JP1与心肌小节蛋白α-Actinin和Troponin-T是否呈共表达,流式细胞术定量确认JP1阳染率.另以大鼠胎心为研究对象,大鼠受精后第14天起,每隔2d取胎心直至分娩新生鼠,供RT-PCR和免疫印迹实验用.结果:ES细胞分化过程中,JP1在基因转录层面全程表达,至第11天达高峰.蛋白层面呈一过性表达,在第9天达高峰,此后迅速下降,至分化培养第15天消失,分化成熟期未见表达.大鼠胎心表达趋势与ES细胞分化过程基本一致,但JP1蛋白表达持续在出生后.在分化终端,流式细胞术显示JP2和肌小节蛋白双染率达16.59％,而未见JP1阳染细胞.结论:JP1基因在小鼠ES细胞定向分化心肌细胞全程均有转录,但JP1仅在分化早期有一过性表达.大鼠胎心JP1表达趋势与ES细胞分化过程基本相一致.
目的:評價膜連接蛋白Junctophilin 1 (JP1)亞型在哺乳動物心肌髮生過程中,基因轉錄和蛋白錶達特徵,為心肌髮育生物學及心髒再生醫學相關生命現象本質提供實驗依據.方法:小鼠胚胎于( embryonic stem,ES)細胞相繼製成單細胞懸液和懸滴,收集擬胚體轉至培養皿中懸浮分化培養.每隔2d收集細胞供分子生物學評價,併于心肌分化成熟期(第17天),免疫熒光成像原位檢測JP1與心肌小節蛋白α-Actinin和Troponin-T是否呈共錶達,流式細胞術定量確認JP1暘染率.另以大鼠胎心為研究對象,大鼠受精後第14天起,每隔2d取胎心直至分娩新生鼠,供RT-PCR和免疫印跡實驗用.結果:ES細胞分化過程中,JP1在基因轉錄層麵全程錶達,至第11天達高峰.蛋白層麵呈一過性錶達,在第9天達高峰,此後迅速下降,至分化培養第15天消失,分化成熟期未見錶達.大鼠胎心錶達趨勢與ES細胞分化過程基本一緻,但JP1蛋白錶達持續在齣生後.在分化終耑,流式細胞術顯示JP2和肌小節蛋白雙染率達16.59％,而未見JP1暘染細胞.結論:JP1基因在小鼠ES細胞定嚮分化心肌細胞全程均有轉錄,但JP1僅在分化早期有一過性錶達.大鼠胎心JP1錶達趨勢與ES細胞分化過程基本相一緻.
목적:평개막련접단백Junctophilin 1 (JP1)아형재포유동물심기발생과정중,기인전록화단백표체특정,위심기발육생물학급심장재생의학상관생명현상본질제공실험의거.방법:소서배태우( embryonic stem,ES)세포상계제성단세포현액화현적,수집의배체전지배양명중현부분화배양.매격2d수집세포공분자생물학평개,병우심기분화성숙기(제17천),면역형광성상원위검측JP1여심기소절단백α-Actinin화Troponin-T시부정공표체,류식세포술정량학인JP1양염솔.령이대서태심위연구대상,대서수정후제14천기,매격2d취태심직지분면신생서,공RT-PCR화면역인적실험용.결과:ES세포분화과정중,JP1재기인전록층면전정표체,지제11천체고봉.단백층면정일과성표체,재제9천체고봉,차후신속하강,지분화배양제15천소실,분화성숙기미견표체.대서태심표체추세여ES세포분화과정기본일치,단JP1단백표체지속재출생후.재분화종단,류식세포술현시JP2화기소절단백쌍염솔체16.59％,이미견JP1양염세포.결론:JP1기인재소서ES세포정향분화심기세포전정균유전록,단JP1부재분화조기유일과성표체.대서태심JP1표체추세여ES세포분화과정기본상일치.
