青岛大学医学院学报
青島大學醫學院學報
청도대학의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QINGDAO UNIVERSITATIS
2003年
3期
228-230
,共3页
毛伟征%孙道升%司春祥%隋爱华%刘湘萍%陈栋%吕振华
毛偉徵%孫道升%司春祥%隋愛華%劉湘萍%陳棟%呂振華
모위정%손도승%사춘상%수애화%류상평%진동%려진화
重组体筛选%聚合酶链反应%克隆,分子%大肠杆菌
重組體篩選%聚閤酶鏈反應%剋隆,分子%大腸桿菌
중조체사선%취합매련반응%극륭,분자%대장간균
①目的以PCR法在菌液中快速筛选重组克隆.②方法提取小鼠巨噬细胞总RNA,反转录PCR(RT-PCR)获得肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因片段,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌JM109.在大肠杆菌培养中的不同时间取样测定大肠杆菌A600值及计数.以不同数量的大肠杆菌为模板进行系列PCR扩增,获得适宜PCR扩增条件的大肠杆菌数.③结果以菌液为模板进行PCR能够快速筛选重组体,大肠杆菌模板数在125～250个范围内,PCR对阳性克隆的扩增可获得良好结果;获得常规培养条件下转化大肠杆菌的生长曲线,A600值与大肠杆菌计数间存在显著正相关(r=0.93,P<0.001).④结论通过测定大肠杆菌培养液A600值推算大肠杆菌数量,以适宜的大肠杆菌模板行PCR法筛选重组克隆,快速准确并方便下游操作.
①目的以PCR法在菌液中快速篩選重組剋隆.②方法提取小鼠巨噬細胞總RNA,反轉錄PCR(RT-PCR)穫得腫瘤壞死因子-α(TNF-α)基因片段,TA剋隆連接質粒載體、轉化大腸桿菌JM109.在大腸桿菌培養中的不同時間取樣測定大腸桿菌A600值及計數.以不同數量的大腸桿菌為模闆進行繫列PCR擴增,穫得適宜PCR擴增條件的大腸桿菌數.③結果以菌液為模闆進行PCR能夠快速篩選重組體,大腸桿菌模闆數在125～250箇範圍內,PCR對暘性剋隆的擴增可穫得良好結果;穫得常規培養條件下轉化大腸桿菌的生長麯線,A600值與大腸桿菌計數間存在顯著正相關(r=0.93,P<0.001).④結論通過測定大腸桿菌培養液A600值推算大腸桿菌數量,以適宜的大腸桿菌模闆行PCR法篩選重組剋隆,快速準確併方便下遊操作.
①목적이PCR법재균액중쾌속사선중조극륭.②방법제취소서거서세포총RNA,반전록PCR(RT-PCR)획득종류배사인자-α(TNF-α)기인편단,TA극륭련접질립재체、전화대장간균JM109.재대장간균배양중적불동시간취양측정대장간균A600치급계수.이불동수량적대장간균위모판진행계렬PCR확증,획득괄의PCR확증조건적대장간균수.③결과이균액위모판진행PCR능구쾌속사선중조체,대장간균모판수재125～250개범위내,PCR대양성극륭적확증가획득량호결과;획득상규배양조건하전화대장간균적생장곡선,A600치여대장간균계수간존재현저정상관(r=0.93,P<0.001).④결론통과측정대장간균배양액A600치추산대장간균수량,이괄의적대장간균모판행PCR법사선중조극륭,쾌속준학병방편하유조작.
