免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2008年
1期
5-8
,共4页
林媛%祁志荣%孙岚%李明远%蒋忠华%张林%李虹
林媛%祁誌榮%孫嵐%李明遠%蔣忠華%張林%李虹
림원%기지영%손람%리명원%장충화%장림%리홍
IP-10%绿脓杆菌外毒素%重组免疫毒素%原核表达
IP-10%綠膿桿菌外毒素%重組免疫毒素%原覈錶達
IP-10%록농간균외독소%중조면역독소%원핵표체
目的 构建大鼠γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL基因的原核融合表达载体,并对其表达进行鉴定.方法 通过PCR获得本实验所需要的IP-10基因片段,通过酶切含有PE38KDEL的质粒PRKL459K获得绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL基因 ,再通过适当的酶切及连接反应,构建IP-10与PE38KDEL融合基因的原核表达载体pET-32a (+)-IP-10-PE38KDEL,重组质粒经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定证实构建成功后, 转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western-blotting分析证实其相对分子质量和特异性.结果 酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,IP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆入原核表达载体pET-32a(+),并在大肠杆菌中稳定表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符,且所表达蛋白可被抗PE的特异性抗体识别.结论 成功构建了原核表达载体pET-32a(+)-IP-10-PE38KDEL,其融合基因在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究其功能奠定了基础.
目的 構建大鼠γ榦擾素誘導蛋白10(IP-10)基因和綠膿桿菌外毒素衍生物PE38KDEL基因的原覈融閤錶達載體,併對其錶達進行鑒定.方法 通過PCR穫得本實驗所需要的IP-10基因片段,通過酶切含有PE38KDEL的質粒PRKL459K穫得綠膿桿菌外毒素衍生物PE38KDEL基因 ,再通過適噹的酶切及連接反應,構建IP-10與PE38KDEL融閤基因的原覈錶達載體pET-32a (+)-IP-10-PE38KDEL,重組質粒經限製性內切酶、PCR及DNA序列測定證實構建成功後, 轉化感受態大腸桿菌BL21,經IPTG誘導錶達,錶達產物經SDS-PAGE及Western-blotting分析證實其相對分子質量和特異性.結果 酶切分析、PCR及DNA序列測定證實,IP-10-PE38KDEL融閤基因被成功剋隆入原覈錶達載體pET-32a(+),併在大腸桿菌中穩定錶達,錶達產物的相對分子質量與預期值相符,且所錶達蛋白可被抗PE的特異性抗體識彆.結論 成功構建瞭原覈錶達載體pET-32a(+)-IP-10-PE38KDEL,其融閤基因在大腸桿菌中高效錶達,為進一步研究其功能奠定瞭基礎.
목적 구건대서γ간우소유도단백10(IP-10)기인화록농간균외독소연생물PE38KDEL기인적원핵융합표체재체,병대기표체진행감정.방법 통과PCR획득본실험소수요적IP-10기인편단,통과매절함유PE38KDEL적질립PRKL459K획득록농간균외독소연생물PE38KDEL기인 ,재통과괄당적매절급련접반응,구건IP-10여PE38KDEL융합기인적원핵표체재체pET-32a (+)-IP-10-PE38KDEL,중조질립경한제성내절매、PCR급DNA서렬측정증실구건성공후, 전화감수태대장간균BL21,경IPTG유도표체,표체산물경SDS-PAGE급Western-blotting분석증실기상대분자질량화특이성.결과 매절분석、PCR급DNA서렬측정증실,IP-10-PE38KDEL융합기인피성공극륭입원핵표체재체pET-32a(+),병재대장간균중은정표체,표체산물적상대분자질량여예기치상부,차소표체단백가피항PE적특이성항체식별.결론 성공구건료원핵표체재체pET-32a(+)-IP-10-PE38KDEL,기융합기인재대장간균중고효표체,위진일보연구기공능전정료기출.
