细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
3期
231-233,237
,共4页
李娜%朱道银%帖儒修%王瑜伟
李娜%硃道銀%帖儒脩%王瑜偉
리나%주도은%첩유수%왕유위
Ipr1基因%结核病%绿色荧光蛋白%定位
Ipr1基因%結覈病%綠色熒光蛋白%定位
Ipr1기인%결핵병%록색형광단백%정위
目的: 构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体, 观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW264.7中的表达.方法: 从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA, 以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列, 克隆至pEGFP-C1载体中, 筛选阳性克隆作PCR、酶切及测序鉴定后得到pEGFP-Ipr1, 脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7, 以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照.采用RT-PCR法检测Ipr1的RNA水平表达及用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及细胞内定位.结果: 扩增出小鼠Ipr1基因编码序列, 经PCR、酶切及测序鉴定证明得到正确的重组质粒pEGFP-Ipr1, 脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7得到了成功表达, Ipr1基因表达产物定位于细胞核内.结论: 成功地调取小鼠Ipr1基因, 构建了小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体并在小鼠巨噬细胞株RAW264.7得到了成功表达.Ipr1编码蛋白定位于细胞核内, 提示其是一种调节蛋白.
目的: 構建小鼠胞內病原體抗性基因1(Ipr1)基因與EGFP基因融閤錶達載體, 觀察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬細胞株RAW264.7中的錶達.方法: 從C57BL/6J小鼠胸腺組織提取總RNA, 以RT-PCR法調取Ipr1基因編碼序列, 剋隆至pEGFP-C1載體中, 篩選暘性剋隆作PCR、酶切及測序鑒定後得到pEGFP-Ipr1, 脂質體瞬時轉染小鼠巨噬細胞株RAW264.7, 以空質粒pEGFP-C1轉染組作為對照.採用RT-PCR法檢測Ipr1的RNA水平錶達及用激光共聚焦顯微鏡觀察融閤蛋白的錶達及細胞內定位.結果: 擴增齣小鼠Ipr1基因編碼序列, 經PCR、酶切及測序鑒定證明得到正確的重組質粒pEGFP-Ipr1, 脂質體瞬時轉染小鼠巨噬細胞株RAW264.7得到瞭成功錶達, Ipr1基因錶達產物定位于細胞覈內.結論: 成功地調取小鼠Ipr1基因, 構建瞭小鼠Ipr1基因與EGFP基因融閤錶達載體併在小鼠巨噬細胞株RAW264.7得到瞭成功錶達.Ipr1編碼蛋白定位于細胞覈內, 提示其是一種調節蛋白.
목적: 구건소서포내병원체항성기인1(Ipr1)기인여EGFP기인융합표체재체, 관찰소서Ipr1기인재소서거서세포주RAW264.7중적표체.방법: 종C57BL/6J소서흉선조직제취총RNA, 이RT-PCR법조취Ipr1기인편마서렬, 극륭지pEGFP-C1재체중, 사선양성극륭작PCR、매절급측서감정후득도pEGFP-Ipr1, 지질체순시전염소서거서세포주RAW264.7, 이공질립pEGFP-C1전염조작위대조.채용RT-PCR법검측Ipr1적RNA수평표체급용격광공취초현미경관찰융합단백적표체급세포내정위.결과: 확증출소서Ipr1기인편마서렬, 경PCR、매절급측서감정증명득도정학적중조질립pEGFP-Ipr1, 지질체순시전염소서거서세포주RAW264.7득도료성공표체, Ipr1기인표체산물정위우세포핵내.결론: 성공지조취소서Ipr1기인, 구건료소서Ipr1기인여EGFP기인융합표체재체병재소서거서세포주RAW264.7득도료성공표체.Ipr1편마단백정위우세포핵내, 제시기시일충조절단백.
