西南民族大学学报(自然科学版)
西南民族大學學報(自然科學版)
서남민족대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF SOUTHWEST UNIVERSITY FOR NATIONALITIES(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
2期
276-280
,共5页
傅安静%汤承%李定霏%谢青%岳华
傅安靜%湯承%李定霏%謝青%嶽華
부안정%탕승%리정비%사청%악화
RNA干涉%腺病毒裁体,鸡胚成纤维细胞,绿荧光蛋白
RNA榦涉%腺病毒裁體,鷄胚成纖維細胞,綠熒光蛋白
RNA간섭%선병독재체,계배성섬유세포,록형광단백
鸡胚成纤维细胞(CEF)是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料.本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台.采用GFP重组非复制型腺病毒载体(Ade-GFP)转染CEF细胞;结果证明0.1-2000MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞;胞核与胞浆可见明亮的荧光; 荧光细胞数量及荧光强度在24-36h达到高峰;以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3%;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示;Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变:多数转染组细胞活力不受影响;说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达;干涉效率为85%:证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制;为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础.
鷄胚成纖維細胞(CEF)是多種動物及人類病毒的易感細胞;也是研究鷄的基因組功能的理想材料.本試驗的目的是研究非複製型腺病毒載體對CEF的轉染效率及安全性;併建立在CEF細胞中進行RNAi的技術平檯.採用GFP重組非複製型腺病毒載體(Ade-GFP)轉染CEF細胞;結果證明0.1-2000MOI Adv-GFP均可轉染CEF細胞併錶達GFP;轉染後16h開始齣現GFP暘性細胞;胞覈與胞漿可見明亮的熒光; 熒光細胞數量及熒光彊度在24-36h達到高峰;以後逐漸衰減;約180h全部消失;轉染效率最高為22.3%;形態學觀察及流式細胞儀測定結果顯示;Adv-GFP轉染的CEF細胞未見細胞病變:多數轉染組細胞活力不受影響;說明用Adv-GFP攜帶外源轉染CEF細胞是安全可行的;用脂質體轉染試劑轉染化學閤成的GFP-siRNA;成功地榦涉瞭腺病毒載體介導的GFP基因在鷄胚成纖維細胞的錶達;榦涉效率為85%:證明瞭鷄胚成纖維細胞中存在RNAi機製;為進一步利用非複製型腺病毒載體遞送siRNA在CEF細胞內進行RNAi的研究奠定瞭基礎.
계배성섬유세포(CEF)시다충동물급인류병독적역감세포;야시연구계적기인조공능적이상재료.본시험적목적시연구비복제형선병독재체대CEF적전염효솔급안전성;병건립재CEF세포중진행RNAi적기술평태.채용GFP중조비복제형선병독재체(Ade-GFP)전염CEF세포;결과증명0.1-2000MOI Adv-GFP균가전염CEF세포병표체GFP;전염후16h개시출현GFP양성세포;포핵여포장가견명량적형광; 형광세포수량급형광강도재24-36h체도고봉;이후축점쇠감;약180h전부소실;전염효솔최고위22.3%;형태학관찰급류식세포의측정결과현시;Adv-GFP전염적CEF세포미견세포병변:다수전염조세포활력불수영향;설명용Adv-GFP휴대외원전염CEF세포시안전가행적;용지질체전염시제전염화학합성적GFP-siRNA;성공지간섭료선병독재체개도적GFP기인재계배성섬유세포적표체;간섭효솔위85%:증명료계배성섬유세포중존재RNAi궤제;위진일보이용비복제형선병독재체체송siRNA재CEF세포내진행RNAi적연구전정료기출.
