广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2010年
20期
2616-2619
,共4页
王长青%尹永硕%李雷%谢玉波%肖强
王長青%尹永碩%李雷%謝玉波%肖彊
왕장청%윤영석%리뢰%사옥파%초강
E2F-1%胃癌%MGC-803细胞%细胞增殖%转录因子
E2F-1%胃癌%MGC-803細胞%細胞增殖%轉錄因子
E2F-1%위암%MGC-803세포%세포증식%전록인자
目的 了解E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响.方法 PCR扩增E2F-1基因片段,然后经限制性内切酶 EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达的情况.对稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进行MTT法检测,绘制生长曲线和计算细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞周期分布.结果 RT-PCR和Western blotting 实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.MTT法检测发现,与MGC-803/EV细胞组和MGC-803细胞组相比,胃癌MGC-803/E2F-1细胞的生长受到明显抑制,增殖率下降(26.61±5.19)% vs(93.4±10.29)%、(100±0.00)%(均P<0.01);细胞周期分析显示MGC-803/E2F-1组的细胞在G0/G1期所占比例为70.70%,高于MGC-803/EV组(59.60%,P<0.01)和MGC-803细胞组(1.40%,P<0.01);MGC-803/E2F-1组的细胞在S期所占比例为17.60%,明显低于MGC-803/EV组的30.70%(P<0.01)和MGC-803细胞组的27.30%(P<0.01).结论 E2F-1基因过表达抑制胃癌细胞的增殖和生长,细胞周期停滞在G0/G1期.
目的 瞭解E2F-1過錶達對胃癌細胞MGC-803增殖、生長和細胞週期的影響.方法 PCR擴增E2F-1基因片段,然後經限製性內切酶 EcoRⅠ和HindⅢ雙酶切後將E2F-1定嚮剋隆到真覈錶達載體pCMV-HA2中轉化篩選.用脂質體Lipofectamine 2000將該載體轉染MGC-803胃癌細胞,然後用含G418的培養基篩選穫得具Genectin抗性的過錶達E2F-1的胃癌細胞株.RT-PCR和Western blot技術檢測MGC-803/E2F-1細胞內E2F-1錶達的情況.對穩定轉染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1細胞(實驗組)、轉染空載體的MGC-803/EV(陰性對照組)及未轉染的MGC-803細胞進行MTT法檢測,繪製生長麯線和計算細胞增殖率;流式細胞儀檢測各組細胞週期分佈.結果 RT-PCR和Western blotting 實驗證實重組載體pCMV-E2F-1-HA2成功轉入胃癌細胞內,併穩定過錶達E2F-1.MTT法檢測髮現,與MGC-803/EV細胞組和MGC-803細胞組相比,胃癌MGC-803/E2F-1細胞的生長受到明顯抑製,增殖率下降(26.61±5.19)% vs(93.4±10.29)%、(100±0.00)%(均P<0.01);細胞週期分析顯示MGC-803/E2F-1組的細胞在G0/G1期所佔比例為70.70%,高于MGC-803/EV組(59.60%,P<0.01)和MGC-803細胞組(1.40%,P<0.01);MGC-803/E2F-1組的細胞在S期所佔比例為17.60%,明顯低于MGC-803/EV組的30.70%(P<0.01)和MGC-803細胞組的27.30%(P<0.01).結論 E2F-1基因過錶達抑製胃癌細胞的增殖和生長,細胞週期停滯在G0/G1期.
목적 료해E2F-1과표체대위암세포MGC-803증식、생장화세포주기적영향.방법 PCR확증E2F-1기인편단,연후경한제성내절매 EcoRⅠ화HindⅢ쌍매절후장E2F-1정향극륭도진핵표체재체pCMV-HA2중전화사선.용지질체Lipofectamine 2000장해재체전염MGC-803위암세포,연후용함G418적배양기사선획득구Genectin항성적과표체E2F-1적위암세포주.RT-PCR화Western blot기술검측MGC-803/E2F-1세포내E2F-1표체적정황.대은정전염E2F-1적위암MGC-803/E2F-1세포(실험조)、전염공재체적MGC-803/EV(음성대조조)급미전염적MGC-803세포진행MTT법검측,회제생장곡선화계산세포증식솔;류식세포의검측각조세포주기분포.결과 RT-PCR화Western blotting 실험증실중조재체pCMV-E2F-1-HA2성공전입위암세포내,병은정과표체E2F-1.MTT법검측발현,여MGC-803/EV세포조화MGC-803세포조상비,위암MGC-803/E2F-1세포적생장수도명현억제,증식솔하강(26.61±5.19)% vs(93.4±10.29)%、(100±0.00)%(균P<0.01);세포주기분석현시MGC-803/E2F-1조적세포재G0/G1기소점비례위70.70%,고우MGC-803/EV조(59.60%,P<0.01)화MGC-803세포조(1.40%,P<0.01);MGC-803/E2F-1조적세포재S기소점비례위17.60%,명현저우MGC-803/EV조적30.70%(P<0.01)화MGC-803세포조적27.30%(P<0.01).결론 E2F-1기인과표체억제위암세포적증식화생장,세포주기정체재G0/G1기.
