CAJ | 학술논문

背景:外周血平滑肌祖细胞具有向平滑肌细胞分化的能力.目的:探索体外分离培养成人外周血平滑肌祖细胞的方法及其生长分化特性.方法:采用密度梯度离心法分离获得成人外周血单个核细胞,培养12 d后,应用流式细胞仪鉴定分析平滑肌祖细胞并分选纯化,继续培养诱导分化.采用倒置显微镜观察平滑肌祖细胞的形态变化,免疫荧光染色法观察其α-肌动蛋白的表达,同时应用Western blot法检测调宁蛋白、平滑肌肌球蛋白重链的表达情况.此外,观察平滑肌祖细胞的生长特性,绘制生长曲线.结果与结论:成人外周血单个核细胞诱导培养4 d时开始出现细胞集落,12 d时细胞呈明显梭形.流式细胞仪分析显示,CD14和CD105双阳性的平滑肌祖细胞占贴壁细胞的(71.8±7.2)%.分选纯化的平滑肌祖细胞培养到28 d呈旋涡状生长.间接免疫荧光染色显示,α-肌动蛋白表达呈阳性.Western blot检测显示,调宁蛋白和平滑肌肌球蛋白重链分别于14,21 d开始表达,并逐渐增加.生长曲线表明,细胞生长至第6天进入对数生长期,第12天后进入平台期.提示通过对外周血单个核细胞的诱导培养,可以获得大量的平滑肌祖细胞.它能稳定增殖,并可进一步分化为平滑肌细胞.
배경:외주혈평활기조세포구유향평활기세포분화적능력.목적:탐색체외분리배양성인외주혈평활기조세포적방법급기생장분화특성.방법:채용밀도제도리심법분리획득성인외주혈단개핵세포,배양12 d후,응용류식세포의감정분석평활기조세포병분선순화,계속배양유도분화.채용도치현미경관찰평활기조세포적형태변화,면역형광염색법관찰기α-기동단백적표체,동시응용Western blot법검측조저단백、평활기기구단백중련적표체정황.차외,관찰평활기조세포적생장특성,회제생장곡선.결과여결론:성인외주혈단개핵세포유도배양4 d시개시출현세포집락,12 d시세포정명현사형.류식세포의분석현시,CD14화CD105쌍양성적평활기조세포점첩벽세포적(71.8±7.2)%.분선순화적평활기조세포배양도28 d정선와상생장.간접면역형광염색현시,α-기동단백표체정양성.Western blot검측현시,조저단백화평활기기구단백중련분별우14,21 d개시표체,병축점증가.생장곡선표명,세포생장지제6천진입대수생장기,제12천후진입평태기.제시통과대외주혈단개핵세포적유도배양,가이획득대량적평활기조세포.타능은정증식,병가진일보분화위평활기세포.