安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2011年
11期
1109-1113
,共5页
赵前峰%陈红霞%任翠平%刘淼%沈际佳
趙前峰%陳紅霞%任翠平%劉淼%瀋際佳
조전봉%진홍하%임취평%류묘%침제가
日本血吸虫%Nanos样蛋白%原核表达
日本血吸蟲%Nanos樣蛋白%原覈錶達
일본혈흡충%Nanos양단백%원핵표체
目的 获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA 序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定.方法 应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用 ELISA 和 Western blot法对表达蛋白进行初步鉴定.结果 该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的ORF为672 bp,编码 223个氨基酸,理论相对分子量为25 ku;半定量RT-PCR技术分析显示该基因在日本血吸虫的虫卵及各期虫体有不同的表达量;成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-SjNanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western blot分析表明该重组蛋白具有较好的免疫原性.结论 获得日本血吸虫Nanos 蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了日本血吸虫Nanos样基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础.
目的 穫得日本血吸蟲Nanos樣蛋白基因的cDNA 序列,剋隆、錶達和純化原覈蛋白併初步鑒定.方法 應用PCR法擴增穫得日本血吸蟲Nanos樣基因的完整開放閱讀框(ORF),將該基因亞剋隆到原覈錶達載體pET28a(+),誘導錶達併純化融閤蛋白.用純化後的蛋白免疫傢兔,製備該蛋白的多剋隆抗體,分彆用 ELISA 和 Western blot法對錶達蛋白進行初步鑒定.結果 該基因為日本血吸蟲的一箇新基因,其編碼序列的ORF為672 bp,編碼 223箇氨基痠,理論相對分子量為25 ku;半定量RT-PCR技術分析顯示該基因在日本血吸蟲的蟲卵及各期蟲體有不同的錶達量;成功構建瞭該基因的重組錶達質粒pET28a(+)-SjNanos,併在大腸埃希菌中穫得錶達,Western blot分析錶明該重組蛋白具有較好的免疫原性.結論 穫得日本血吸蟲Nanos 蛋白編碼基因的全長ORF,在大腸桿菌中剋隆錶達瞭日本血吸蟲Nanos樣基因,併製備瞭特異性多剋隆抗體,為進一步研究其在日本血吸蟲生殖生物學中的功能奠定瞭基礎.
목적 획득일본혈흡충Nanos양단백기인적cDNA 서렬,극륭、표체화순화원핵단백병초보감정.방법 응용PCR법확증획득일본혈흡충Nanos양기인적완정개방열독광(ORF),장해기인아극륭도원핵표체재체pET28a(+),유도표체병순화융합단백.용순화후적단백면역가토,제비해단백적다극륭항체,분별용 ELISA 화 Western blot법대표체단백진행초보감정.결과 해기인위일본혈흡충적일개신기인,기편마서렬적ORF위672 bp,편마 223개안기산,이론상대분자량위25 ku;반정량RT-PCR기술분석현시해기인재일본혈흡충적충란급각기충체유불동적표체량;성공구건료해기인적중조표체질립pET28a(+)-SjNanos,병재대장애희균중획득표체,Western blot분석표명해중조단백구유교호적면역원성.결론 획득일본혈흡충Nanos 단백편마기인적전장ORF,재대장간균중극륭표체료일본혈흡충Nanos양기인,병제비료특이성다극륭항체,위진일보연구기재일본혈흡충생식생물학중적공능전정료기출.
