口腔医学
口腔醫學
구강의학
STOMATOLOGY
2012年
4期
196-199
,共4页
张平%傅瑜%江宏兵%陶震江
張平%傅瑜%江宏兵%陶震江
장평%부유%강굉병%도진강
Jmjde%RNA干扰%表观遗传修饰%组蛋白去甲基化酶
Jmjde%RNA榦擾%錶觀遺傳脩飾%組蛋白去甲基化酶
Jmjde%RNA간우%표관유전수식%조단백거갑기화매
目的 构建针对SD大鼠Jmjd3基因RNAi慢病毒载体,转染大鼠骨髓间充质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs) 后观察其对Jmjd3基因的抑制作用并筛选最有效干扰序列.方法 设计4对Jmjd3基因shRNA寡核苷酸序列,插入pGCSIL - GFP载体形成重组载体.重组载体经过测序鉴定后转染293T细胞生产病毒液,病毒液转染大鼠BMSCs,Western blot分析转染前后Jmjd3表达情况.通过计算Jmjd3灰度值/ACTIN灰度值,筛选出最有效的干扰序列.结果 测序结果证实Jmjd3基因shRNA寡核苷酸序列正确插入载体中,成功构建4个大鼠Jmjd3基因RNAi表达载体.Western blot检测显示转染后Jmjd3 蛋白表达显著下调,半定量分析显示相对于未转染组,shRNA -1组、shRNA -2组、shRNA -3组、shRNA -4组分别下调79.5％ (P ＜0.001)、90.7％ (P ＜0.001)、73.7％ (P ＜0.001)、56.5％ (P ＜0.001),而GFP组下调11.5％ (P ＞0.05),shRNA -2组为最佳干扰序列.结论 针对大鼠Jmjd3基因RNAi慢病毒载体构建成功,并能有效抑制BMSCs中Jmjd3基因的表达.
目的 構建針對SD大鼠Jmjd3基因RNAi慢病毒載體,轉染大鼠骨髓間充質細胞(bone marrow stromal cells,BMSCs) 後觀察其對Jmjd3基因的抑製作用併篩選最有效榦擾序列.方法 設計4對Jmjd3基因shRNA寡覈苷痠序列,插入pGCSIL - GFP載體形成重組載體.重組載體經過測序鑒定後轉染293T細胞生產病毒液,病毒液轉染大鼠BMSCs,Western blot分析轉染前後Jmjd3錶達情況.通過計算Jmjd3灰度值/ACTIN灰度值,篩選齣最有效的榦擾序列.結果 測序結果證實Jmjd3基因shRNA寡覈苷痠序列正確插入載體中,成功構建4箇大鼠Jmjd3基因RNAi錶達載體.Western blot檢測顯示轉染後Jmjd3 蛋白錶達顯著下調,半定量分析顯示相對于未轉染組,shRNA -1組、shRNA -2組、shRNA -3組、shRNA -4組分彆下調79.5％ (P ＜0.001)、90.7％ (P ＜0.001)、73.7％ (P ＜0.001)、56.5％ (P ＜0.001),而GFP組下調11.5％ (P ＞0.05),shRNA -2組為最佳榦擾序列.結論 針對大鼠Jmjd3基因RNAi慢病毒載體構建成功,併能有效抑製BMSCs中Jmjd3基因的錶達.
목적 구건침대SD대서Jmjd3기인RNAi만병독재체,전염대서골수간충질세포(bone marrow stromal cells,BMSCs) 후관찰기대Jmjd3기인적억제작용병사선최유효간우서렬.방법 설계4대Jmjd3기인shRNA과핵감산서렬,삽입pGCSIL - GFP재체형성중조재체.중조재체경과측서감정후전염293T세포생산병독액,병독액전염대서BMSCs,Western blot분석전염전후Jmjd3표체정황.통과계산Jmjd3회도치/ACTIN회도치,사선출최유효적간우서렬.결과 측서결과증실Jmjd3기인shRNA과핵감산서렬정학삽입재체중,성공구건4개대서Jmjd3기인RNAi표체재체.Western blot검측현시전염후Jmjd3 단백표체현저하조,반정량분석현시상대우미전염조,shRNA -1조、shRNA -2조、shRNA -3조、shRNA -4조분별하조79.5％ (P ＜0.001)、90.7％ (P ＜0.001)、73.7％ (P ＜0.001)、56.5％ (P ＜0.001),이GFP조하조11.5％ (P ＞0.05),shRNA -2조위최가간우서렬.결론 침대대서Jmjd3기인RNAi만병독재체구건성공,병능유효억제BMSCs중Jmjd3기인적표체.
