实用皮肤病学杂志
實用皮膚病學雜誌
실용피부병학잡지
JOURNAL OF PRACTRCAL DERMATOLOGY
2012年
4期
193-198
,共6页
黑素瘤,转移性%干细胞因子%受体,干细胞因子%稳定转染%A375细胞
黑素瘤,轉移性%榦細胞因子%受體,榦細胞因子%穩定轉染%A375細胞
흑소류,전이성%간세포인자%수체,간세포인자%은정전염%A375세포
目的 利用基因工程方法建立稳定表达干细胞因子受体(SCF/c-kit)的恶性黑素瘤A375细胞株,再给予外源性SCF/c-kit,观察其对A375细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过脂质体转染技术构建稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株(hc-kit/A375),给予A375细胞和hc-kit/A375细胞外源性SCF,将所有的细胞分为A375组、A375-SCF组、hc-kit/A375组和hc-kit/A375-SCF组.应用MTT法及流式细胞仪分析细胞的增殖和凋亡,并应用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组化方法检测肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶(MMP)-9及肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达.结果 ①通过脂质体介导能将c-kit-pcDNA3.1neo重组质粒成功转染入黑素瘤细胞,建立稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株hckit/A375,hc-kit/A375细胞中c-kit表达明显增加.②给予外源性SCF后,细胞的生长受到抑制,以培养后第5天尤为显著；细胞的凋亡率明显增加,S期比例降低,且hc-kit/A375-SCF组尤明显.③转染后细胞及加入SCF干预组VEGF、MMP-9分泌减少,而TNF-α的分泌增加.结论 通过脂质体转染和G418筛选成功构建稳定表达c-kit的A375细胞株；通过增加A375细胞中SCF/c-kit的表达能改变肿瘤细胞对VEGF、MMP-9、TNF-α的分泌,抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡.
目的 利用基因工程方法建立穩定錶達榦細胞因子受體(SCF/c-kit)的噁性黑素瘤A375細胞株,再給予外源性SCF/c-kit,觀察其對A375細胞增殖、凋亡的影響.方法 通過脂質體轉染技術構建穩定錶達c-kit的黑素瘤細胞株(hc-kit/A375),給予A375細胞和hc-kit/A375細胞外源性SCF,將所有的細胞分為A375組、A375-SCF組、hc-kit/A375組和hc-kit/A375-SCF組.應用MTT法及流式細胞儀分析細胞的增殖和凋亡,併應用酶聯免疫吸附法(ELISA)和免疫組化方法檢測腫瘤細胞血管內皮生長因子(VEGF),基質金屬蛋白酶(MMP)-9及腫瘤壞死因子(TNF)-α的錶達.結果 ①通過脂質體介導能將c-kit-pcDNA3.1neo重組質粒成功轉染入黑素瘤細胞,建立穩定錶達c-kit的黑素瘤細胞株hckit/A375,hc-kit/A375細胞中c-kit錶達明顯增加.②給予外源性SCF後,細胞的生長受到抑製,以培養後第5天尤為顯著；細胞的凋亡率明顯增加,S期比例降低,且hc-kit/A375-SCF組尤明顯.③轉染後細胞及加入SCF榦預組VEGF、MMP-9分泌減少,而TNF-α的分泌增加.結論 通過脂質體轉染和G418篩選成功構建穩定錶達c-kit的A375細胞株；通過增加A375細胞中SCF/c-kit的錶達能改變腫瘤細胞對VEGF、MMP-9、TNF-α的分泌,抑製腫瘤細胞的增殖,促進其凋亡.
목적 이용기인공정방법건립은정표체간세포인자수체(SCF/c-kit)적악성흑소류A375세포주,재급여외원성SCF/c-kit,관찰기대A375세포증식、조망적영향.방법 통과지질체전염기술구건은정표체c-kit적흑소류세포주(hc-kit/A375),급여A375세포화hc-kit/A375세포외원성SCF,장소유적세포분위A375조、A375-SCF조、hc-kit/A375조화hc-kit/A375-SCF조.응용MTT법급류식세포의분석세포적증식화조망,병응용매련면역흡부법(ELISA)화면역조화방법검측종류세포혈관내피생장인자(VEGF),기질금속단백매(MMP)-9급종류배사인자(TNF)-α적표체.결과 ①통과지질체개도능장c-kit-pcDNA3.1neo중조질립성공전염입흑소류세포,건립은정표체c-kit적흑소류세포주hckit/A375,hc-kit/A375세포중c-kit표체명현증가.②급여외원성SCF후,세포적생장수도억제,이배양후제5천우위현저；세포적조망솔명현증가,S기비례강저,차hc-kit/A375-SCF조우명현.③전염후세포급가입SCF간예조VEGF、MMP-9분비감소,이TNF-α적분비증가.결론 통과지질체전염화G418사선성공구건은정표체c-kit적A375세포주；통과증가A375세포중SCF/c-kit적표체능개변종류세포대VEGF、MMP-9、TNF-α적분비,억제종류세포적증식,촉진기조망.
