生物医学工程学杂志
生物醫學工程學雜誌
생물의학공정학잡지
2005年
6期
1241-1244
,共4页
张承武%蔡青松%李自成%翟朝阳%郑煜
張承武%蔡青鬆%李自成%翟朝暘%鄭煜
장승무%채청송%리자성%적조양%정욱
神经营养素-6%成熟肽%融合表达
神經營養素-6%成熟肽%融閤錶達
신경영양소-6%성숙태%융합표체
为了得到人源性神经营养素-6(Neurotrophin-6, NT-6)成熟肽片段,本研究以经测序鉴定的人源性NT-6 cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增得到NT-6蛋白成熟肽编码区基因片段;将该基因克隆到融合表达载体pGEX1-λT,构建重组原核融合表达质粒pGEX-NT-6;在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)诱导的条件下,观察融合蛋白在大肠杆菌JM109中的表达情况;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化.结果表明经PCR扩增后,得到一分子量为460 bp左右的片段 ;含有该片段的重组质粒经电泳及双酶切鉴定表明,所得到的重组质粒即为含有目的片段的pGEX1-NT-6;与带有pGEX1-λT质粒的细菌相对照,pGEX1-NT-6质粒转化的大肠杆菌JM109,在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,该蛋白分子量为41 KD.获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量大约为15 KD的 NT-6成熟肽.本研究成功构建了人源性NT-6成熟肽编码区基因融合表达载体,并纯化了其表达产物,为研究人源性NT-6的生物学功能奠定了基础.
為瞭得到人源性神經營養素-6(Neurotrophin-6, NT-6)成熟肽片段,本研究以經測序鑒定的人源性NT-6 cDNA為模闆,通過聚閤酶鏈式反應(Polymerase chain reaction,PCR)擴增得到NT-6蛋白成熟肽編碼區基因片段;將該基因剋隆到融閤錶達載體pGEX1-λT,構建重組原覈融閤錶達質粒pGEX-NT-6;在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)誘導的條件下,觀察融閤蛋白在大腸桿菌JM109中的錶達情況;利用蛋白迴收試劑盒對錶達產物進行純化.結果錶明經PCR擴增後,得到一分子量為460 bp左右的片段 ;含有該片段的重組質粒經電泳及雙酶切鑒定錶明,所得到的重組質粒即為含有目的片段的pGEX1-NT-6;與帶有pGEX1-λT質粒的細菌相對照,pGEX1-NT-6質粒轉化的大腸桿菌JM109,在IPTG誘導下錶達瞭特異性的融閤蛋白,該蛋白分子量為41 KD.穫得的融閤蛋白經凝血酶酶切後,得到瞭分子量大約為15 KD的 NT-6成熟肽.本研究成功構建瞭人源性NT-6成熟肽編碼區基因融閤錶達載體,併純化瞭其錶達產物,為研究人源性NT-6的生物學功能奠定瞭基礎.
위료득도인원성신경영양소-6(Neurotrophin-6, NT-6)성숙태편단,본연구이경측서감정적인원성NT-6 cDNA위모판,통과취합매련식반응(Polymerase chain reaction,PCR)확증득도NT-6단백성숙태편마구기인편단;장해기인극륭도융합표체재체pGEX1-λT,구건중조원핵융합표체질립pGEX-NT-6;재이병기-β-D-류대반유당감(Isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)유도적조건하,관찰융합단백재대장간균JM109중적표체정황;이용단백회수시제합대표체산물진행순화.결과표명경PCR확증후,득도일분자량위460 bp좌우적편단 ;함유해편단적중조질립경전영급쌍매절감정표명,소득도적중조질립즉위함유목적편단적pGEX1-NT-6;여대유pGEX1-λT질립적세균상대조,pGEX1-NT-6질립전화적대장간균JM109,재IPTG유도하표체료특이성적융합단백,해단백분자량위41 KD.획득적융합단백경응혈매매절후,득도료분자량대약위15 KD적 NT-6성숙태.본연구성공구건료인원성NT-6성숙태편마구기인융합표체재체,병순화료기표체산물,위연구인원성NT-6적생물학공능전정료기출.
