中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2006年
4期
362-364
,共3页
王峤%相世和%母凯萍%母敬郁%王恩思
王嶠%相世和%母凱萍%母敬鬱%王恩思
왕교%상세화%모개평%모경욱%왕은사
Thermus thermophilus%DNA聚合酶%RT-PCR
Thermus thermophilus%DNA聚閤酶%RT-PCR
Thermus thermophilus%DNA취합매%RT-PCR
目的研究重组Thermus thermophilus DNA聚合酶的表达、纯化和应用.方法提取Thermus thermophilus hb8基因组DNA作为模板,PCR扩增Tth DNA聚合酶基因后,克隆至pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用His-Bind Quick Cartridge 300纯化重组Tth DNA聚合酶His-tag融合蛋白.提取Thermomonospora fusca总RNA,用一管法RT-PCR扩增E2 cd基因,检测重组Tth DNA聚合酶RT-PCR活性.结果大肠杆菌表达Tth DNA聚合酶,分离出的电泳纯重组Tth DNA聚合酶His-tag融合蛋白相对分子质量为94 000,表达产量为200 000 U/L.一管法RT-PCR可扩增出850 bp长度的E2 cd基因.结论重组Tth DNA聚合酶已成功地表达和纯化,并用于RT-PCR.
目的研究重組Thermus thermophilus DNA聚閤酶的錶達、純化和應用.方法提取Thermus thermophilus hb8基因組DNA作為模闆,PCR擴增Tth DNA聚閤酶基因後,剋隆至pET28a錶達載體上,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,用His-Bind Quick Cartridge 300純化重組Tth DNA聚閤酶His-tag融閤蛋白.提取Thermomonospora fusca總RNA,用一管法RT-PCR擴增E2 cd基因,檢測重組Tth DNA聚閤酶RT-PCR活性.結果大腸桿菌錶達Tth DNA聚閤酶,分離齣的電泳純重組Tth DNA聚閤酶His-tag融閤蛋白相對分子質量為94 000,錶達產量為200 000 U/L.一管法RT-PCR可擴增齣850 bp長度的E2 cd基因.結論重組Tth DNA聚閤酶已成功地錶達和純化,併用于RT-PCR.
목적연구중조Thermus thermophilus DNA취합매적표체、순화화응용.방법제취Thermus thermophilus hb8기인조DNA작위모판,PCR확증Tth DNA취합매기인후,극륭지pET28a표체재체상,전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체,용His-Bind Quick Cartridge 300순화중조Tth DNA취합매His-tag융합단백.제취Thermomonospora fusca총RNA,용일관법RT-PCR확증E2 cd기인,검측중조Tth DNA취합매RT-PCR활성.결과대장간균표체Tth DNA취합매,분리출적전영순중조Tth DNA취합매His-tag융합단백상대분자질량위94 000,표체산량위200 000 U/L.일관법RT-PCR가확증출850 bp장도적E2 cd기인.결론중조Tth DNA취합매이성공지표체화순화,병용우RT-PCR.
