环境科学
環境科學
배경과학
CHINESE JOURNAL OF ENVIRONMENTAL SCIENCE
2006年
8期
1613-1617
,共5页
杨朝晖%肖勇%曾光明%刘云国%邓久华
楊朝暉%肖勇%曾光明%劉雲國%鄧久華
양조휘%초용%증광명%류운국%산구화
堆肥%分子生态学%16S rRNA%DNA提取%RFLP
堆肥%分子生態學%16S rRNA%DNA提取%RFLP
퇴비%분자생태학%16S rRNA%DNA제취%RFLP
分子生态学为堆肥微生物的研究提供了新的技术手段,DNA的提取是该技术的基础,但由于腐殖酸类物质的污染,增加了堆肥微生物总DNA的提取难度.采用了3种不同的方法(溶菌酶法、超声波破碎法和蛋白酶K-CTAB法)从堆肥中提取微生物的总DNA,使用核酸和蛋白质分析仪检测后表明3种提取方法获得的DNA产量均较高;琼脂糖凝胶电泳结果表明其长度约为23 kb;使用细菌16S rRNA基因通用引物(27F和1 495R)对总DNA进行PCR扩增,都获得了几乎全长的16S rDNA序列(约1.5kb);利用限制性内切酶(Hae Ⅲ和Alu Ⅰ)对纯化后的PCR产物进行RFLP分析,结果表明3种方法提取的DNA反映了比较一致的微生物多样性.虽然3种方法各有优缺点,但其提取的DNA都可以用于堆肥微生物的分子生态学研究,可以根据实际需要选用某一种方法用于提取堆肥总DNA.
分子生態學為堆肥微生物的研究提供瞭新的技術手段,DNA的提取是該技術的基礎,但由于腐殖痠類物質的汙染,增加瞭堆肥微生物總DNA的提取難度.採用瞭3種不同的方法(溶菌酶法、超聲波破碎法和蛋白酶K-CTAB法)從堆肥中提取微生物的總DNA,使用覈痠和蛋白質分析儀檢測後錶明3種提取方法穫得的DNA產量均較高;瓊脂糖凝膠電泳結果錶明其長度約為23 kb;使用細菌16S rRNA基因通用引物(27F和1 495R)對總DNA進行PCR擴增,都穫得瞭幾乎全長的16S rDNA序列(約1.5kb);利用限製性內切酶(Hae Ⅲ和Alu Ⅰ)對純化後的PCR產物進行RFLP分析,結果錶明3種方法提取的DNA反映瞭比較一緻的微生物多樣性.雖然3種方法各有優缺點,但其提取的DNA都可以用于堆肥微生物的分子生態學研究,可以根據實際需要選用某一種方法用于提取堆肥總DNA.
분자생태학위퇴비미생물적연구제공료신적기술수단,DNA적제취시해기술적기출,단유우부식산류물질적오염,증가료퇴비미생물총DNA적제취난도.채용료3충불동적방법(용균매법、초성파파쇄법화단백매K-CTAB법)종퇴비중제취미생물적총DNA,사용핵산화단백질분석의검측후표명3충제취방법획득적DNA산량균교고;경지당응효전영결과표명기장도약위23 kb;사용세균16S rRNA기인통용인물(27F화1 495R)대총DNA진행PCR확증,도획득료궤호전장적16S rDNA서렬(약1.5kb);이용한제성내절매(Hae Ⅲ화Alu Ⅰ)대순화후적PCR산물진행RFLP분석,결과표명3충방법제취적DNA반영료비교일치적미생물다양성.수연3충방법각유우결점,단기제취적DNA도가이용우퇴비미생물적분자생태학연구,가이근거실제수요선용모일충방법용우제취퇴비총DNA.
