CAJ | 학술논문

参照Genebank中非洲猪瘟VP73基因序列,人工合成的VP73全基因克隆至pMD 18-T克隆载体质粒中,采用PCR扩增得到1188 bp的VP73基因;将VP73基因片段亚克隆插入pBAD/Thio表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP73基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了非洲猪瘟病毒VP73基因重组表达载体.经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP73蛋白抗原.SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002%的L-Arabinose进行诱导,4h后表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,分子量约60kDa,表达产量约占菌体总蛋白的30%.Western blotting和ELISA检测表明,表达的融合蛋白能与非洲猪瘟阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物为非洲猪瘟病毒VP73融合蛋白,且具有良好的反应原性,这为应用该表达蛋白抗原制备ASFV免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础.
삼조Genebank중비주저온VP73기인서렬,인공합성적VP73전기인극륭지pMD 18-T극륭재체질립중,채용PCR확증득도1188 bp적VP73기인;장VP73기인편단아극륭삽입pBAD/Thio표체재체,경측서감정,사선획득VP73기인정향삽입、유정학독마광적양성극륭,성공구건료비주저온병독VP73기인중조표체재체.경L-Arabinose유도표체,가은정、고효지표체VP73단백항원.SDS-PAGE결과표명,이종농도위0.002%적L-Arabinose진행유도,4h후표체량최고,표체단백위융합단백,분자량약60kDa,표체산량약점균체총단백적30%.Western blotting화ELISA검측표명,표체적융합단백능여비주저온양성혈청발생특이성반응,설명표체획득적산물위비주저온병독VP73융합단백,차구유량호적반응원성,저위응용해표체단백항원제비ASFV면역혈청학진단시제화역묘연구전정료기출.