生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
1期
161-165
,共5页
吴克良%时永香%白增亮%田海滨%张楠%刘兰兰%刘昌彬
吳剋良%時永香%白增亮%田海濱%張楠%劉蘭蘭%劉昌彬
오극량%시영향%백증량%전해빈%장남%류란란%류창빈
细胞核移植%重构胚%去核%注核
細胞覈移植%重構胚%去覈%註覈
세포핵이식%중구배%거핵%주핵
为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,对以前的操作进行了改进.首先以预先吸有细胞核或细胞的注射针在固定于持卵针上的卵母细胞透明带上穿刺两个孔,然后一边缓慢地将注射针回拔至卵周隙中,一边逐渐增加持卵针中的负压,直至极体与目标核质被完整吸入持卵针中而完成去核,最后在不拔出注射针的情况下直接注射细胞核或完整细胞进而完成重构胚的构建.用此方法对200个卵母细胞进行注核和注细胞操作,平均完成一个重构胚的构建各自耗时约40s和30s,成功率分别为62.6%和86.0%.用核染料Hoechst 33342对卵母细胞的去核效率进行验证,去核成功率达到73.3%.实验证明,用此方法可以在只有倒置显微镜和显微操作仪的条件下一次性快速完成去核和注核,大大提高了细胞核移植的效率和重构胚成活率;更重要的是该方法操作简单,新手可以很快掌握该技术,易于在实际工作中推广应用.
為瞭能夠找齣一種既容易操作,又不需要特殊設備的覈移植方法,對以前的操作進行瞭改進.首先以預先吸有細胞覈或細胞的註射針在固定于持卵針上的卵母細胞透明帶上穿刺兩箇孔,然後一邊緩慢地將註射針迴拔至卵週隙中,一邊逐漸增加持卵針中的負壓,直至極體與目標覈質被完整吸入持卵針中而完成去覈,最後在不拔齣註射針的情況下直接註射細胞覈或完整細胞進而完成重構胚的構建.用此方法對200箇卵母細胞進行註覈和註細胞操作,平均完成一箇重構胚的構建各自耗時約40s和30s,成功率分彆為62.6%和86.0%.用覈染料Hoechst 33342對卵母細胞的去覈效率進行驗證,去覈成功率達到73.3%.實驗證明,用此方法可以在隻有倒置顯微鏡和顯微操作儀的條件下一次性快速完成去覈和註覈,大大提高瞭細胞覈移植的效率和重構胚成活率;更重要的是該方法操作簡單,新手可以很快掌握該技術,易于在實際工作中推廣應用.
위료능구조출일충기용역조작,우불수요특수설비적핵이식방법,대이전적조작진행료개진.수선이예선흡유세포핵혹세포적주사침재고정우지란침상적란모세포투명대상천자량개공,연후일변완만지장주사침회발지란주극중,일변축점증가지란침중적부압,직지겁체여목표핵질피완정흡입지란침중이완성거핵,최후재불발출주사침적정황하직접주사세포핵혹완정세포진이완성중구배적구건.용차방법대200개란모세포진행주핵화주세포조작,평균완성일개중구배적구건각자모시약40s화30s,성공솔분별위62.6%화86.0%.용핵염료Hoechst 33342대란모세포적거핵효솔진행험증,거핵성공솔체도73.3%.실험증명,용차방법가이재지유도치현미경화현미조작의적조건하일차성쾌속완성거핵화주핵,대대제고료세포핵이식적효솔화중구배성활솔;경중요적시해방법조작간단,신수가이흔쾌장악해기술,역우재실제공작중추엄응용.
