CAJ | 학술논문

目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法.方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成.①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供.②实验过程:取20 g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白.③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性.结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14 400的人心脏型脂肪酸结合蛋白.②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6 mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20 mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束.③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14 000,纯度约为90%;Westem印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致.实验从20 g湿重心室肌中共纯化得到15.4 mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77 mg/g.结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化.
목적:이왕적심장형지방산결합단백다래자우、서등동물심기조직,본실험구건료인좌심실심기조직순화심장형지방산결합단백적신방법.방법:실험우2005-01/03재남경의과대학제일부속의원심혈관병연구소완성.①실험재료:인심실기유남경의과대학제일부속의원심혈관병연구소제공.②실험과정:취20 g인좌심실기재완충액중균장,다보취리심후이(NH4)2SO4진행염석→재차리심→침정완충액중현투석득단백조제액→Sephadex G-75응효과려→전영학정주요단백조대적수집관호합병수집→QSepharose Fast Flow음리자교환층석→취을이순농축→완충액투석득인심장형지방산결합단백.③실험평고:이SIGMA공사인심장형지방산결합단백위대조표준품;이Tricine-SDS-PAGE전영감정상대분자질량;이서항인지방산결합단백단극륭항체급양항서IgG대기진행Western인적검측감정기특이성.결과:①Sephadex G-75응효과려주층석결과:각조분경Tricine-SDS-PAGE전영검측증실,부분수집관중존재상대분자질량약14 400적인심장형지방산결합단백.②음리자교환주층석결과:재세탈액NaCl농도체6 mmol/L시,출현단백봉,인심장형지방산결합단백피세탈;NaCl농도체20 mmol/L시,단백봉강지기선,단백세탈결속.③순화적인심장형지방산결합단백감정결과:경전영현시기상대분자질량약위14 000,순도약위90%;Westem인적증실기가피항인지방산결합단백단극륭항체특이식별,여대조표준품SIGMA공사인심장형지방산결합단백결과일치.실험종20 g습중심실기중공순화득도15.4 mg심장형지방산결합단백,득솔위0.77 mg/g.결론:Sephadex G-75응효과려주층석급음리자교환주층석상결합,가용우인심장형지방산결합단백적순화.