CAJ | 학술논문

背景:现阶段诱导骨髓基质细胞分化成骨的方法大致分为在化学药物作用、细胞因子作用以及转基因作用下的分化等.目的:观察腺相关病毒介导人血管内皮生长因子165基因转染对人骨髓基质细胞成骨能力的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/12在郧阳医学院附属人民医院临床研究所和骨关节科完成.材料:人骨髓基质细胞取自健康成年男性自愿者.人血管内皮生长因子165基因重组腺相关病毒、β半乳糖酐酶基因重组复制缺陷性腺相关病毒由课题组前期构建.方法:抽取健康志愿者髂前上棘骨髓,采用全骨髓法分离培养人骨髓基质细胞.体外扩增纯化后取50%融合的P2代细胞,随机分为4组:腺相关病毒介导人血管内皮生长因子组向细胞培养液中加入人血管内皮生长因子165基因重组腺相关病毒1×1010OPU/mL,孵育24 h后换为普通完全培养液继续培养.β半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒组加入半乳糖酐酶基因重组复制缺陷性腺相关病毒,其余处理与前组相同.阳性对照组向培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠.空白对照组仅加入普通完全培养液,不进行特殊处理.主要观察指标:全自动生化分析仪检测培养上清碱性磷酸酶活性,免疫组化染色观察血管内皮生长因子的表达,Von Kossa染色检测人骨髓基质细胞中骨胶原结节形成.结果:处理后2周,腺相关病毒介导人血管内皮生长因子组与阳性对照组的培养上清碱性磷酸酶活性基本相似(P>0.05),而β半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒组、空白对照组的培养上清碱性磷酸酶活性均明显降低(P<0.01).血管内皮生长因子主要在骨髓基质细胞的胞浆内表达,腺相关病毒介导人血管内皮生长因子组阳性细胞数明显多于其他3组.腺相关病毒介导人血管内皮生长因子组和阳性对照组可见大量红色骨胶原结节形成,明显多于β半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒组、空白对照组.结论:基因重组腺相关病毒人血管内皮生长因子165转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用. 揹景:現階段誘導骨髓基質細胞分化成骨的方法大緻分為在化學藥物作用、細胞因子作用以及轉基因作用下的分化等.目的:觀察腺相關病毒介導人血管內皮生長因子165基因轉染對人骨髓基質細胞成骨能力的影響.設計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2008-03/12在鄖暘醫學院附屬人民醫院臨床研究所和骨關節科完成.材料:人骨髓基質細胞取自健康成年男性自願者.人血管內皮生長因子165基因重組腺相關病毒、β半乳糖酐酶基因重組複製缺陷性腺相關病毒由課題組前期構建.方法:抽取健康誌願者髂前上棘骨髓,採用全骨髓法分離培養人骨髓基質細胞.體外擴增純化後取50%融閤的P2代細胞,隨機分為4組:腺相關病毒介導人血管內皮生長因子組嚮細胞培養液中加入人血管內皮生長因子165基因重組腺相關病毒1×1010OPU/mL,孵育24 h後換為普通完全培養液繼續培養.β半乳糖酐酶基因重組腺相關病毒組加入半乳糖酐酶基因重組複製缺陷性腺相關病毒,其餘處理與前組相同.暘性對照組嚮培養液中添加地塞米鬆、抗壞血痠和β-甘油燐痠鈉.空白對照組僅加入普通完全培養液,不進行特殊處理.主要觀察指標:全自動生化分析儀檢測培養上清堿性燐痠酶活性,免疫組化染色觀察血管內皮生長因子的錶達,Von Kossa染色檢測人骨髓基質細胞中骨膠原結節形成.結果:處理後2週,腺相關病毒介導人血管內皮生長因子組與暘性對照組的培養上清堿性燐痠酶活性基本相似(P>0.05),而β半乳糖酐酶基因重組腺相關病毒組、空白對照組的培養上清堿性燐痠酶活性均明顯降低(P<0.01).血管內皮生長因子主要在骨髓基質細胞的胞漿內錶達,腺相關病毒介導人血管內皮生長因子組暘性細胞數明顯多于其他3組.腺相關病毒介導人血管內皮生長因子組和暘性對照組可見大量紅色骨膠原結節形成,明顯多于β半乳糖酐酶基因重組腺相關病毒組、空白對照組.結論:基因重組腺相關病毒人血管內皮生長因子165轉染對人骨髓基質細胞成骨能力具有促進作用.
배경:현계단유도골수기질세포분화성골적방법대치분위재화학약물작용、세포인자작용이급전기인작용하적분화등.목적:관찰선상관병독개도인혈관내피생장인자165기인전염대인골수기질세포성골능력적영향.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2008-03/12재운양의학원부속인민의원림상연구소화골관절과완성.재료:인골수기질세포취자건강성년남성자원자.인혈관내피생장인자165기인중조선상관병독、β반유당항매기인중조복제결함성선상관병독유과제조전기구건.방법:추취건강지원자가전상극골수,채용전골수법분리배양인골수기질세포.체외확증순화후취50%융합적P2대세포,수궤분위4조:선상관병독개도인혈관내피생장인자조향세포배양액중가입인혈관내피생장인자165기인중조선상관병독1×1010OPU/mL,부육24 h후환위보통완전배양액계속배양.β반유당항매기인중조선상관병독조가입반유당항매기인중조복제결함성선상관병독,기여처리여전조상동.양성대조조향배양액중첨가지새미송、항배혈산화β-감유린산납.공백대조조부가입보통완전배양액,불진행특수처리.주요관찰지표:전자동생화분석의검측배양상청감성린산매활성,면역조화염색관찰혈관내피생장인자적표체,Von Kossa염색검측인골수기질세포중골효원결절형성.결과:처리후2주,선상관병독개도인혈관내피생장인자조여양성대조조적배양상청감성린산매활성기본상사(P>0.05),이β반유당항매기인중조선상관병독조、공백대조조적배양상청감성린산매활성균명현강저(P<0.01).혈관내피생장인자주요재골수기질세포적포장내표체,선상관병독개도인혈관내피생장인자조양성세포수명현다우기타3조.선상관병독개도인혈관내피생장인자조화양성대조조가견대량홍색골효원결절형성,명현다우β반유당항매기인중조선상관병독조、공백대조조.결론:기인중조선상관병독인혈관내피생장인자165전염대인골수기질세포성골능력구유촉진작용.