CAJ | 학술논문

为构建和表达抗RT单链抗体(ScFv)蛋白,用RT-PCR方法从能分泌特异性抗RT单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗RT-ScFv基因.将ScFv基因连接到pMAL-p2X表达载体,转化TB1表达菌.阳性克隆用IPTG诱导18h,Western blotting鉴定重组蛋白.结果表明,试验成功扩增出了ScFv基因.长度约为750bp.通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(Gly4 Ser)3-VH.其VH全长363 bp,可编码121个氨基酸,VL全长324 bp,可编码108个氨基酸.SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,抗RT-ScFv在TB1表达菌中获得高效表达,pMAL-p2X表达的ScFv加上同时融合表达的MBP标签分子质量约为75 ku.本试验成功构建了pMAL-RT-ScFv表达载体,并获得了高效表达.
위구건화표체항RT단련항체(ScFv)단백,용RT-PCR방법종능분비특이성항RT단극륭항체(McAb)적잡교류세포중분리순화항체VH화VL기인.용중첩연신PCR방법장VH화VL병접재일기,구건항RT-ScFv기인.장ScFv기인련접도pMAL-p2X표체재체,전화TB1표체균.양성극륭용IPTG유도18h,Western blotting감정중조단백.결과표명,시험성공확증출료ScFv기인.장도약위750bp.통과DNA서렬측정화분석,구건출VL-(Gly4 Ser)3-VH.기VH전장363 bp,가편마121개안기산,VL전장324 bp,가편마108개안기산.SDS-PAGE화Western blotting분석결과표명,항RT-ScFv재TB1표체균중획득고효표체,pMAL-p2X표체적ScFv가상동시융합표체적MBP표첨분자질량약위75 ku.본시험성공구건료pMAL-RT-ScFv표체재체,병획득료고효표체.