植物保护
植物保護
식물보호
PLANT PROTECTION
2011年
6期
75-81,101
,共8页
林承喜%束长龙%翟元娜%林毅%宋福平%张杰
林承喜%束長龍%翟元娜%林毅%宋福平%張傑
림승희%속장룡%적원나%림의%송복평%장걸
Cry1Ba3%定点突变%生物活性测定%小菜蛾
Cry1Ba3%定點突變%生物活性測定%小菜蛾
Cry1Ba3%정점돌변%생물활성측정%소채아
Cry1Ba3是由本实验室发掘的对小菜蛾有高毒力的杀虫晶体蛋白.为了寻找对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,本研究利用P(ō)le Bio-Informatique Lyonnais数据库对Cry1Ba3的二级结构进行模拟；采用BioEdit软件分析Cry1Ba3的疏水区；将Cry1Ba3与Cry1 Aa1、Cry2Aa1、Cry3Aa1以及Cry4Ba1进行多序列比对,从而确定了20个氨基酸突变位点.利用半重叠引物PCR的方法对Cry1Ba3进行定点突变,将突变体在大肠杆菌BL21中进行诱导表达.通过浸叶法对各个突变蛋白杀小菜蛾的生物活性进行测定.获得的20个Cry1Ba3突变体均能在大肠杆菌BL21中表达,并以包涵体形式存在.杀虫活性测定结果表明M6(R192L)、M10(W303A)、M19(H485G)对小菜蛾的活性明显降低,二级结构预测表明活性降低的突变蛋白的构象均发生明显变化,其余17种突变蛋白的活性和二级结构都没有明显变化.说明第192位的精氨酸、第303位的色氨酸和第485位的组氨酸对Cry1Ba3的杀小菜蛾活性有重要影响,上述3个位点氨基酸突变引起的蛋白活性减低可能与毒素的空间结构变化有关.
Cry1Ba3是由本實驗室髮掘的對小菜蛾有高毒力的殺蟲晶體蛋白.為瞭尋找對殺蟲活性有重要影響的氨基痠,為殺蟲機理研究和改造殺蟲蛋白提供理論依據,本研究利用P(ō)le Bio-Informatique Lyonnais數據庫對Cry1Ba3的二級結構進行模擬；採用BioEdit軟件分析Cry1Ba3的疏水區；將Cry1Ba3與Cry1 Aa1、Cry2Aa1、Cry3Aa1以及Cry4Ba1進行多序列比對,從而確定瞭20箇氨基痠突變位點.利用半重疊引物PCR的方法對Cry1Ba3進行定點突變,將突變體在大腸桿菌BL21中進行誘導錶達.通過浸葉法對各箇突變蛋白殺小菜蛾的生物活性進行測定.穫得的20箇Cry1Ba3突變體均能在大腸桿菌BL21中錶達,併以包涵體形式存在.殺蟲活性測定結果錶明M6(R192L)、M10(W303A)、M19(H485G)對小菜蛾的活性明顯降低,二級結構預測錶明活性降低的突變蛋白的構象均髮生明顯變化,其餘17種突變蛋白的活性和二級結構都沒有明顯變化.說明第192位的精氨痠、第303位的色氨痠和第485位的組氨痠對Cry1Ba3的殺小菜蛾活性有重要影響,上述3箇位點氨基痠突變引起的蛋白活性減低可能與毒素的空間結構變化有關.
Cry1Ba3시유본실험실발굴적대소채아유고독력적살충정체단백.위료심조대살충활성유중요영향적안기산,위살충궤리연구화개조살충단백제공이론의거,본연구이용P(ō)le Bio-Informatique Lyonnais수거고대Cry1Ba3적이급결구진행모의；채용BioEdit연건분석Cry1Ba3적소수구；장Cry1Ba3여Cry1 Aa1、Cry2Aa1、Cry3Aa1이급Cry4Ba1진행다서렬비대,종이학정료20개안기산돌변위점.이용반중첩인물PCR적방법대Cry1Ba3진행정점돌변,장돌변체재대장간균BL21중진행유도표체.통과침협법대각개돌변단백살소채아적생물활성진행측정.획득적20개Cry1Ba3돌변체균능재대장간균BL21중표체,병이포함체형식존재.살충활성측정결과표명M6(R192L)、M10(W303A)、M19(H485G)대소채아적활성명현강저,이급결구예측표명활성강저적돌변단백적구상균발생명현변화,기여17충돌변단백적활성화이급결구도몰유명현변화.설명제192위적정안산、제303위적색안산화제485위적조안산대Cry1Ba3적살소채아활성유중요영향,상술3개위점안기산돌변인기적단백활성감저가능여독소적공간결구변화유관.
