基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2012年
2期
175-180
,共6页
欧俐苹%郭永灿%罗春丽%赵懿%蔡晓钟
歐俐蘋%郭永燦%囉春麗%趙懿%蔡曉鐘
구리평%곽영찬%라춘려%조의%채효종
PLCE%膀胱癌%侵袭
PLCE%膀胱癌%侵襲
PLCE%방광암%침습
目的 构建PLCE基因的shRNA表达载体转染膀胱癌细胞T24株,观察其对T24细胞转移侵袭等恶性行为的影响.方法 设计合成PLCE基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中,构建重组载体pGenesil-PLCε.重组载体转染T24细胞后,RT-PCR和Western blot检测PLCE基因和蛋白表达；以侵袭小室、明胶酶谱分析及免疫组化检测细胞侵袭能力.结果 成功构建了针对PLCE基因的shRNA表达载体.两个阳性重组质粒P1和P2转染膀胱癌细胞T24,P1和P2组目的基因/内参照吸光度比值较空载HK-A组明显降低(P＜0.01)；P1和P2组目的蛋白/内参照吸光度比值较空载HK-A组明显降低(P＜0.01).细胞侵袭实验中阳性质粒P1和P2转染组穿膜细胞数也明显低于空白对照组和阴性质粒HK-A转染组(P＜0.01)；转染P1、P2均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于空白对照和HK-A转染组(P＜0.01).结论 阻断PLCE基因能有效抑制膀胱癌T24细胞系中PLCE基因和蛋白表达,并对T24细胞的侵袭转移能力具有一定的抑制作用.
目的 構建PLCE基因的shRNA錶達載體轉染膀胱癌細胞T24株,觀察其對T24細胞轉移侵襲等噁性行為的影響.方法 設計閤成PLCE基因mRNA的寡覈苷痠序列,插入綠色熒光蛋白質粒真覈錶達載體pGenesil中,構建重組載體pGenesil-PLCε.重組載體轉染T24細胞後,RT-PCR和Western blot檢測PLCE基因和蛋白錶達；以侵襲小室、明膠酶譜分析及免疫組化檢測細胞侵襲能力.結果 成功構建瞭針對PLCE基因的shRNA錶達載體.兩箇暘性重組質粒P1和P2轉染膀胱癌細胞T24,P1和P2組目的基因/內參照吸光度比值較空載HK-A組明顯降低(P＜0.01)；P1和P2組目的蛋白/內參照吸光度比值較空載HK-A組明顯降低(P＜0.01).細胞侵襲實驗中暘性質粒P1和P2轉染組穿膜細胞數也明顯低于空白對照組和陰性質粒HK-A轉染組(P＜0.01)；轉染P1、P2均使細胞分泌MMP-2、MMP-9明顯低于空白對照和HK-A轉染組(P＜0.01).結論 阻斷PLCE基因能有效抑製膀胱癌T24細胞繫中PLCE基因和蛋白錶達,併對T24細胞的侵襲轉移能力具有一定的抑製作用.
목적 구건PLCE기인적shRNA표체재체전염방광암세포T24주,관찰기대T24세포전이침습등악성행위적영향.방법 설계합성PLCE기인mRNA적과핵감산서렬,삽입록색형광단백질립진핵표체재체pGenesil중,구건중조재체pGenesil-PLCε.중조재체전염T24세포후,RT-PCR화Western blot검측PLCE기인화단백표체；이침습소실、명효매보분석급면역조화검측세포침습능력.결과 성공구건료침대PLCE기인적shRNA표체재체.량개양성중조질립P1화P2전염방광암세포T24,P1화P2조목적기인/내삼조흡광도비치교공재HK-A조명현강저(P＜0.01)；P1화P2조목적단백/내삼조흡광도비치교공재HK-A조명현강저(P＜0.01).세포침습실험중양성질립P1화P2전염조천막세포수야명현저우공백대조조화음성질립HK-A전염조(P＜0.01)；전염P1、P2균사세포분비MMP-2、MMP-9명현저우공백대조화HK-A전염조(P＜0.01).결론 조단PLCE기인능유효억제방광암T24세포계중PLCE기인화단백표체,병대T24세포적침습전이능력구유일정적억제작용.
