医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2011年
2期
26-30
,共5页
张颖%舒旷怡%王金文%赵飞%刘洋%李向阳
張穎%舒曠怡%王金文%趙飛%劉洋%李嚮暘
장영%서광이%왕금문%조비%류양%리향양
LBP%sCD14%TNF-α
LBP%sCD14%TNF-α
LBP%sCD14%TNF-α
目的 研究脂多糖结合蛋白(LBP)、可溶性CD14(sCD14)与脂多糖(LPS)相互作用后对巨噬细胞产生TNF-α的影响.方法 用PMA诱导THP-1细胞为巨噬细胞;设定LPS浓度为1ng/ml,以100、10、1、0.1、0.01的比例,将LBP-LPS混合37℃孵育15min后分别加入细胞培养板中;以及混合后不孵育直接加入;同时设立LBP对照组.在LPS浓度为10ng/ml和1ng/ml两组中,分别加入1、0.5、0.1、0.01μg/ml的sCD14,混合37℃孵育15min后分别加入两组细胞培养板中;以及混合后不孵育直接加入;同时设立sCD14对照组.用免疫化学发光法检测TNF-α的释放情况.最后对数据进行统计学分析.结果 LPS浓度为1ng/ml分泌TNF-α最低(143±9pg/ml),与10、100、1000ng/ml间比较有统计学差异,P均<0.05;10、100、1000ng/ml 三组间无统计学差异(P>0.05);TNF-α的释放量随着LPS的浓度增高会出现饱和现象.浓度为0.01、0.1、1、10、100ng/ml的LBP刺激巨噬细胞TNF-α的释放量分别为39.4±1.2、107±5、109±3、102±1、119±9pg/ml.LBP/LPS浓度比值≤10时,TNF-α释放量随LBP/LPS浓度比值增大而增高,在LBP/LPS浓度比值为10时释放量最高;未孵育组结果为231±10pg/ml,预孵育组结果为164±7pg/ml;两组TNF-α释放量有显著性差异(P<0.01).在LBP/LPS比值为100时,TNF-α释放量下降;未孵育组结果为149±7pg/ml,预孵育组结果为138±2pg/ml.LPS浓度为0时,随着sCD14浓度增加,THP-1细胞释放TNF-α未见增加.LPS浓度为1ng/ml,sCD14浓度为0.01μg/ml和0.1μg/ml时,TNF-α释放量无显著性差异(P=0.515和0.566);sCD14浓度为0.5和1μg/ml,结果有显著性差异(P=0.017和P<0.01).在LPS浓度为10ng/ml,sCD14浓度为0.5μg/ml和1μg/ml时TNF-α释放量结果均有显著性差异(P<0.01).未预孵育组与预孵育组TNF-α的释放量结果有显著性差异(P=0.014).结论 LBP能活化巨噬细胞,低浓度LBP可促进LPS刺激巨噬细胞释放TNF-α,且释放量随LBP浓度的增加而增加;高浓度LBP对LPS刺激巨噬细胞有负性调节作用.sCD14能促进LPS刺激巨噬细胞释放TNF-α,并表现出一定的剂量效应关系.
目的 研究脂多糖結閤蛋白(LBP)、可溶性CD14(sCD14)與脂多糖(LPS)相互作用後對巨噬細胞產生TNF-α的影響.方法 用PMA誘導THP-1細胞為巨噬細胞;設定LPS濃度為1ng/ml,以100、10、1、0.1、0.01的比例,將LBP-LPS混閤37℃孵育15min後分彆加入細胞培養闆中;以及混閤後不孵育直接加入;同時設立LBP對照組.在LPS濃度為10ng/ml和1ng/ml兩組中,分彆加入1、0.5、0.1、0.01μg/ml的sCD14,混閤37℃孵育15min後分彆加入兩組細胞培養闆中;以及混閤後不孵育直接加入;同時設立sCD14對照組.用免疫化學髮光法檢測TNF-α的釋放情況.最後對數據進行統計學分析.結果 LPS濃度為1ng/ml分泌TNF-α最低(143±9pg/ml),與10、100、1000ng/ml間比較有統計學差異,P均<0.05;10、100、1000ng/ml 三組間無統計學差異(P>0.05);TNF-α的釋放量隨著LPS的濃度增高會齣現飽和現象.濃度為0.01、0.1、1、10、100ng/ml的LBP刺激巨噬細胞TNF-α的釋放量分彆為39.4±1.2、107±5、109±3、102±1、119±9pg/ml.LBP/LPS濃度比值≤10時,TNF-α釋放量隨LBP/LPS濃度比值增大而增高,在LBP/LPS濃度比值為10時釋放量最高;未孵育組結果為231±10pg/ml,預孵育組結果為164±7pg/ml;兩組TNF-α釋放量有顯著性差異(P<0.01).在LBP/LPS比值為100時,TNF-α釋放量下降;未孵育組結果為149±7pg/ml,預孵育組結果為138±2pg/ml.LPS濃度為0時,隨著sCD14濃度增加,THP-1細胞釋放TNF-α未見增加.LPS濃度為1ng/ml,sCD14濃度為0.01μg/ml和0.1μg/ml時,TNF-α釋放量無顯著性差異(P=0.515和0.566);sCD14濃度為0.5和1μg/ml,結果有顯著性差異(P=0.017和P<0.01).在LPS濃度為10ng/ml,sCD14濃度為0.5μg/ml和1μg/ml時TNF-α釋放量結果均有顯著性差異(P<0.01).未預孵育組與預孵育組TNF-α的釋放量結果有顯著性差異(P=0.014).結論 LBP能活化巨噬細胞,低濃度LBP可促進LPS刺激巨噬細胞釋放TNF-α,且釋放量隨LBP濃度的增加而增加;高濃度LBP對LPS刺激巨噬細胞有負性調節作用.sCD14能促進LPS刺激巨噬細胞釋放TNF-α,併錶現齣一定的劑量效應關繫.
목적 연구지다당결합단백(LBP)、가용성CD14(sCD14)여지다당(LPS)상호작용후대거서세포산생TNF-α적영향.방법 용PMA유도THP-1세포위거서세포;설정LPS농도위1ng/ml,이100、10、1、0.1、0.01적비례,장LBP-LPS혼합37℃부육15min후분별가입세포배양판중;이급혼합후불부육직접가입;동시설립LBP대조조.재LPS농도위10ng/ml화1ng/ml량조중,분별가입1、0.5、0.1、0.01μg/ml적sCD14,혼합37℃부육15min후분별가입량조세포배양판중;이급혼합후불부육직접가입;동시설립sCD14대조조.용면역화학발광법검측TNF-α적석방정황.최후대수거진행통계학분석.결과 LPS농도위1ng/ml분비TNF-α최저(143±9pg/ml),여10、100、1000ng/ml간비교유통계학차이,P균<0.05;10、100、1000ng/ml 삼조간무통계학차이(P>0.05);TNF-α적석방량수착LPS적농도증고회출현포화현상.농도위0.01、0.1、1、10、100ng/ml적LBP자격거서세포TNF-α적석방량분별위39.4±1.2、107±5、109±3、102±1、119±9pg/ml.LBP/LPS농도비치≤10시,TNF-α석방량수LBP/LPS농도비치증대이증고,재LBP/LPS농도비치위10시석방량최고;미부육조결과위231±10pg/ml,예부육조결과위164±7pg/ml;량조TNF-α석방량유현저성차이(P<0.01).재LBP/LPS비치위100시,TNF-α석방량하강;미부육조결과위149±7pg/ml,예부육조결과위138±2pg/ml.LPS농도위0시,수착sCD14농도증가,THP-1세포석방TNF-α미견증가.LPS농도위1ng/ml,sCD14농도위0.01μg/ml화0.1μg/ml시,TNF-α석방량무현저성차이(P=0.515화0.566);sCD14농도위0.5화1μg/ml,결과유현저성차이(P=0.017화P<0.01).재LPS농도위10ng/ml,sCD14농도위0.5μg/ml화1μg/ml시TNF-α석방량결과균유현저성차이(P<0.01).미예부육조여예부육조TNF-α적석방량결과유현저성차이(P=0.014).결론 LBP능활화거서세포,저농도LBP가촉진LPS자격거서세포석방TNF-α,차석방량수LBP농도적증가이증가;고농도LBP대LPS자격거서세포유부성조절작용.sCD14능촉진LPS자격거서세포석방TNF-α,병표현출일정적제량효응관계.
