延边大学医学学报
延邊大學醫學學報
연변대학의학학보
JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE YANBIAN UNIVERSTIY
2011年
3期
157-160
,共4页
王思远%张辛轲%孙昌元%李芳芳%金权鑫%李英信%李红花%孟繁平
王思遠%張辛軻%孫昌元%李芳芳%金權鑫%李英信%李紅花%孟繁平
왕사원%장신가%손창원%리방방%금권흠%리영신%리홍화%맹번평
受体,胆碱能%HEK293细胞%脂质体转染
受體,膽堿能%HEK293細胞%脂質體轉染
수체,담감능%HEK293세포%지질체전염
目的 将乙酰胆碱受体四聚体前体α亚单位重组质粒(pcDNA3.1-AchRα-BirA)转染至人胚肾293(HEK293)细胞,并在其细胞膜上获得稳定表达.方法 提取重组质粒pcDNA3.1-AchRa-BirA,经限制性核酸内切酶Eco RV单酶切后,行低熔点琼脂糖凝胶电泳检测.采用脂质体转染法,将pcDNA3.1-AchRα-BirA转染至HEK293细胞,经抗生素G418筛选后形成集落状抗性克隆细胞.将表达产物扩大培养,应用免疫荧光技术,以异硫氰酸荧光素标记,经荧光显微镜查看表达情况.[结果]电泳检查发现了大小约为6.964 kb的条带.转染后G418筛选获得抗性克隆细胞,经荧光显微镜观察到HEK293细胞膜上的绿色荧光.结论 成功地将AchRα-BirA基因转染至HEK293细胞膜上且有表达,为下一步构建AchRα四聚体奠定了基础.
目的 將乙酰膽堿受體四聚體前體α亞單位重組質粒(pcDNA3.1-AchRα-BirA)轉染至人胚腎293(HEK293)細胞,併在其細胞膜上穫得穩定錶達.方法 提取重組質粒pcDNA3.1-AchRa-BirA,經限製性覈痠內切酶Eco RV單酶切後,行低鎔點瓊脂糖凝膠電泳檢測.採用脂質體轉染法,將pcDNA3.1-AchRα-BirA轉染至HEK293細胞,經抗生素G418篩選後形成集落狀抗性剋隆細胞.將錶達產物擴大培養,應用免疫熒光技術,以異硫氰痠熒光素標記,經熒光顯微鏡查看錶達情況.[結果]電泳檢查髮現瞭大小約為6.964 kb的條帶.轉染後G418篩選穫得抗性剋隆細胞,經熒光顯微鏡觀察到HEK293細胞膜上的綠色熒光.結論 成功地將AchRα-BirA基因轉染至HEK293細胞膜上且有錶達,為下一步構建AchRα四聚體奠定瞭基礎.
목적 장을선담감수체사취체전체α아단위중조질립(pcDNA3.1-AchRα-BirA)전염지인배신293(HEK293)세포,병재기세포막상획득은정표체.방법 제취중조질립pcDNA3.1-AchRa-BirA,경한제성핵산내절매Eco RV단매절후,행저용점경지당응효전영검측.채용지질체전염법,장pcDNA3.1-AchRα-BirA전염지HEK293세포,경항생소G418사선후형성집락상항성극륭세포.장표체산물확대배양,응용면역형광기술,이이류청산형광소표기,경형광현미경사간표체정황.[결과]전영검사발현료대소약위6.964 kb적조대.전염후G418사선획득항성극륭세포,경형광현미경관찰도HEK293세포막상적록색형광.결론 성공지장AchRα-BirA기인전염지HEK293세포막상차유표체,위하일보구건AchRα사취체전정료기출.
