激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2011年
4期
556-559,489
,共5页
刘华友%朱玲%李帆%王琨%江志钢%吴秀山%李永青
劉華友%硃玲%李帆%王琨%江誌鋼%吳秀山%李永青
류화우%주령%리범%왕곤%강지강%오수산%리영청
Foxp4%原核表达%多克隆抗体
Foxp4%原覈錶達%多剋隆抗體
Foxp4%원핵표체%다극륭항체
Foxp4为Fox基因家族的一员,目前研究发现其与肺、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关.为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体.按照巢式PCR原理,经过两次PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Foxp4基因片段,将其克隆人表达载体pGEX4T-1,转化至大肠杆菌BL21中,再通过1PTG进行诱导表达GST-Foxp4融合蛋白.融合蛋白先经谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,再经切胶纯化回收,然后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别进行Western-blot实验检测抗体效价和特异性.所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Foxp4多克隆抗体,为Foxp4功能的进一步研究奠定了基础.
Foxp4為Fox基因傢族的一員,目前研究髮現其與肺、腸、心髒以及中樞神經繫統的髮育有關.為瞭在斑馬魚模型中進一步研究該基因的功能,有必要製備其多剋隆抗體.按照巢式PCR原理,經過兩次PCR擴增齣親水性和特異性均好的斑馬魚Foxp4基因片段,將其剋隆人錶達載體pGEX4T-1,轉化至大腸桿菌BL21中,再通過1PTG進行誘導錶達GST-Foxp4融閤蛋白.融閤蛋白先經穀胱甘肽瓊脂糖珠親和純化,再經切膠純化迴收,然後免疫新西蘭大白兔製備多剋隆抗體,分彆進行Western-blot實驗檢測抗體效價和特異性.所得結果顯示穫得瞭較高效價和特異性好的斑馬魚Foxp4多剋隆抗體,為Foxp4功能的進一步研究奠定瞭基礎.
Foxp4위Fox기인가족적일원,목전연구발현기여폐、장、심장이급중추신경계통적발육유관.위료재반마어모형중진일보연구해기인적공능,유필요제비기다극륭항체.안조소식PCR원리,경과량차PCR확증출친수성화특이성균호적반마어Foxp4기인편단,장기극륭인표체재체pGEX4T-1,전화지대장간균BL21중,재통과1PTG진행유도표체GST-Foxp4융합단백.융합단백선경곡광감태경지당주친화순화,재경절효순화회수,연후면역신서란대백토제비다극륭항체,분별진행Western-blot실험검측항체효개화특이성.소득결과현시획득료교고효개화특이성호적반마어Foxp4다극륭항체,위Foxp4공능적진일보연구전정료기출.
