CAJ | 학술논문

为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RV Flury LEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒.采用SDS-PAGE和western blot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品.结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RV G蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60 ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RV G蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RV G蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景.
위표체광견병병독(RV)당단백(G),본연구통과RT-PCR방법극륭RV Flury LEP병독주G기인,장기극륭지질립pFastBacHTα중,중조질립pFastBac-RV-G전화DH10Bac감수태세포,경동원중조획득중조간상병독천사질립Bacmid-RV-G,장기전염곤충세포sf21획득함유G기인적중조간상병독.채용SDS-PAGE화western blot대중조단백진행감정급항원성분석,이중조G단백작위포피항원적ELISA검측36빈견혈청양품.결과표명,재Bac-to-bac간상병독계통중표체적RV G단백능여his-tag단극륭항체급RV양성혈청발생특이성반응,기상대분자량위60 ku;여이RV위포피항원적상품화ELISA시제합상비,이중조RV G단백위항원건립적간접ELISA적민감성、특이성화부합솔분별위80%、81.8%화80.6%,표명간상병독계통표체적RV G단백시검측RV항체적이상항원단백,작위일충아단위역묘구유잠재적응용전경.