中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2011年
1期
98-101
,共4页
李健蕊%武燕彬%司书毅%陈鸿珊%蒋建东%彭宗根
李健蕊%武燕彬%司書毅%陳鴻珊%蔣建東%彭宗根
리건예%무연빈%사서의%진홍산%장건동%팽종근
丙型肝炎病毒%丝氨酸蛋白水解酶%高通量筛选模型%荧光共振能量转移
丙型肝炎病毒%絲氨痠蛋白水解酶%高通量篩選模型%熒光共振能量轉移
병형간염병독%사안산단백수해매%고통량사선모형%형광공진능량전이
目的 应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3 - 4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型.方法 将质粒pMAL-c2/NS3 - 4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得到麦芽糖结合的NS3 - 4A融合蛋白,用FRET法测定蛋白水解酶活性,建立特异性蛋白酶抑制剂筛选模型,优化反应体系,评价模型的可靠性.结果 建立了HCV蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,经优化确定了酶及底物用量.在模型可靠性评价中,Z因子高达0.80,变异系数为1.91%.蛋白酶的Km值为4.74 μmol/L,测得已知HCV蛋白酶抑制剂BILN 2061的Ki值为0.30 nmol/L.结论 建立的HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂FRET法筛选模型稳定可靠,适用于高通量筛选.
目的 應用熒光共振能量轉移(FRET)法檢測丙型肝炎病毒(HCV)絲氨痠蛋白水解酶(NS3 - 4A)活性,建立HCV蛋白酶抑製劑篩選模型.方法 將質粒pMAL-c2/NS3 - 4A轉化到大腸桿菌K12TB1中,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,親和層析柱純化得到麥芽糖結閤的NS3 - 4A融閤蛋白,用FRET法測定蛋白水解酶活性,建立特異性蛋白酶抑製劑篩選模型,優化反應體繫,評價模型的可靠性.結果 建立瞭HCV蛋白酶抑製劑高通量篩選模型,經優化確定瞭酶及底物用量.在模型可靠性評價中,Z因子高達0.80,變異繫數為1.91%.蛋白酶的Km值為4.74 μmol/L,測得已知HCV蛋白酶抑製劑BILN 2061的Ki值為0.30 nmol/L.結論 建立的HCV絲氨痠蛋白酶抑製劑FRET法篩選模型穩定可靠,適用于高通量篩選.
목적 응용형광공진능량전이(FRET)법검측병형간염병독(HCV)사안산단백수해매(NS3 - 4A)활성,건립HCV단백매억제제사선모형.방법 장질립pMAL-c2/NS3 - 4A전화도대장간균K12TB1중,경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,친화층석주순화득도맥아당결합적NS3 - 4A융합단백,용FRET법측정단백수해매활성,건립특이성단백매억제제사선모형,우화반응체계,평개모형적가고성.결과 건립료HCV단백매억제제고통량사선모형,경우화학정료매급저물용량.재모형가고성평개중,Z인자고체0.80,변이계수위1.91%.단백매적Km치위4.74 μmol/L,측득이지HCV단백매억제제BILN 2061적Ki치위0.30 nmol/L.결론 건립적HCV사안산단백매억제제FRET법사선모형은정가고,괄용우고통량사선.
