动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2011年
6期
5-8
,共4页
贾球锋%李丽芳%张映%聂向庭
賈毬鋒%李麗芳%張映%聶嚮庭
가구봉%리려방%장영%섭향정
猪肺炎支原体%P97基因%随机肽库%亲和筛选
豬肺炎支原體%P97基因%隨機肽庫%親和篩選
저폐염지원체%P97기인%수궤태고%친화사선
构建猪肺炎支原体(Mhp)P97基因特异性随机肽库,探索从中筛选Mhp抗原表位的可行性.PCR扩增获得Mhp P97基因的部分C-端序列,产物用DNase Ⅰ消化后将回收的P97随机片段(50 bp～100bp)克隆到pC89pⅧ型噬菌粒裁体中,转化XL1-blue感受态细胞,辅助噬菌体VCSM13超感染,获得MhpP97基因特异性噬菌体随机肽库.经过三轮亲和筛选,有效地富集了噬菌体阳性克隆.结果显示,所建肽库的容量约为1.8×104,滴度约为1.3×1012 pfu/mL.随机挑取10个阳性克隆进行ELISA检测,结果显示除1号孔外均为阳性.
構建豬肺炎支原體(Mhp)P97基因特異性隨機肽庫,探索從中篩選Mhp抗原錶位的可行性.PCR擴增穫得Mhp P97基因的部分C-耑序列,產物用DNase Ⅰ消化後將迴收的P97隨機片段(50 bp～100bp)剋隆到pC89pⅧ型噬菌粒裁體中,轉化XL1-blue感受態細胞,輔助噬菌體VCSM13超感染,穫得MhpP97基因特異性噬菌體隨機肽庫.經過三輪親和篩選,有效地富集瞭噬菌體暘性剋隆.結果顯示,所建肽庫的容量約為1.8×104,滴度約為1.3×1012 pfu/mL.隨機挑取10箇暘性剋隆進行ELISA檢測,結果顯示除1號孔外均為暘性.
구건저폐염지원체(Mhp)P97기인특이성수궤태고,탐색종중사선Mhp항원표위적가행성.PCR확증획득Mhp P97기인적부분C-단서렬,산물용DNase Ⅰ소화후장회수적P97수궤편단(50 bp～100bp)극륭도pC89pⅧ형서균립재체중,전화XL1-blue감수태세포,보조서균체VCSM13초감염,획득MhpP97기인특이성서균체수궤태고.경과삼륜친화사선,유효지부집료서균체양성극륭.결과현시,소건태고적용량약위1.8×104,적도약위1.3×1012 pfu/mL.수궤도취10개양성극륭진행ELISA검측,결과현시제1호공외균위양성.
