CAJ | 학술논문

目的:基于差异蛋白质组学探讨一贯煎干预肝硬化的部分效应机制.方法:48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(n=12)及造模组(n=36),采用50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)-橄榄油溶液1 mL/kg腹腔注射(2次/周,共9周)制备大鼠肝硬化模型.于开始造模后3周和6周分别随机处死6只大鼠,作药物干预前的动态观察,其余24只模型大鼠于开始造模后第7周首日随机分为模型组(n=12)及一贯煎干预组(n=12).大鼠于第9周末全部处死取材.双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离肝组织总蛋白,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质;差异蛋白质铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase, Cu/Zn SOD)和DJ-1表达采用蛋白印迹法及免疫组织化学方法进行验证.结果:获得分辨率高、重复性好的肝组织2-DE图谱,经质谱鉴定的50个差异蛋白质中,与氧化应激相关的5个蛋白质分别是Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽S-转移酶Yb-1亚基、醛酮还原酶7,A2.与正常组大鼠比较,模型组肝组织Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2的表达均显著降低,其中Cu/Zn SOD、醛酮还原酶7,A2在造模3周、6周及9周后呈梯级下降,而DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶于造模3周、6周及9周后均呈低水平表达;谷胱甘肽合成酶表达显著升高.治疗结束后与模型组比较,一贯煎组Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2表达均明显增高,谷胱甘肽合成酶表达显著降低.蛋白印迹法及免疫组织化学验证了Cu/Zn SOD、DJ-1在蛋白表达水平的差异,与蛋白质组学结果基本一致.结论:抗氧化应激功能降低是CCl4致大鼠肝硬化的重要病理环节,提高抗氧化应激功能相关蛋白的表达可能是一贯煎治疗CCl4所致大鼠肝硬化的主要效应机制.
목적:기우차이단백질조학탐토일관전간예간경화적부분효응궤제.방법:48지Wistar웅성대서수궤분위정상조(n=12)급조모조(n=36),채용50%사록화탄(carbon tetrachloride,CCl4)-감람유용액1 mL/kg복강주사(2차/주,공9주)제비대서간경화모형.우개시조모후3주화6주분별수궤처사6지대서,작약물간예전적동태관찰,기여24지모형대서우개시조모후제7주수일수궤분위모형조(n=12)급일관전간예조(n=12).대서우제9주말전부처사취재.쌍향응효전영(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)분리간조직총단백,기질보조격광해흡전리비행시간천련질보급수거고사순감정차이표체단백질;차이단백질동/자초양화물기화매(Cu/Zn superoxide dismutase, Cu/Zn SOD)화DJ-1표체채용단백인적법급면역조직화학방법진행험증.결과:획득분변솔고、중복성호적간조직2-DE도보,경질보감정적50개차이단백질중,여양화응격상관적5개단백질분별시Cu/Zn SOD、DJ-1、곡광감태합성매、곡광감태S-전이매Yb-1아기、철동환원매7,A2.여정상조대서비교,모형조간조직Cu/Zn SOD、DJ-1、곡광감태S-전이매급철동환원매7,A2적표체균현저강저,기중Cu/Zn SOD、철동환원매7,A2재조모3주、6주급9주후정제급하강,이DJ-1、곡광감태S-전이매우조모3주、6주급9주후균정저수평표체;곡광감태합성매표체현저승고.치료결속후여모형조비교,일관전조Cu/Zn SOD、DJ-1、곡광감태S-전이매급철동환원매7,A2표체균명현증고,곡광감태합성매표체현저강저.단백인적법급면역조직화학험증료Cu/Zn SOD、DJ-1재단백표체수평적차이,여단백질조학결과기본일치.결론:항양화응격공능강저시CCl4치대서간경화적중요병리배절,제고항양화응격공능상관단백적표체가능시일관전치료CCl4소치대서간경화적주요효응궤제.